Nesprins基因在小鼠心臟發(fā)育過(guò)程中表達(dá)的研究.pdf

1、Nesprins(nuelear envelop speatrin repeat)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的保守的蛋白家族。是細(xì)胞骨架的主要組成部分，具有維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，協(xié)調(diào)細(xì)胞功能的作用。已發(fā)現(xiàn)的nesprins有nesprin-1(又稱(chēng)syne-1/ENAPTIN)、nesprin-2(又稱(chēng)syne-2/NUANCE)和nesprin-3三個(gè)蛋白亞型[1-3]。Neprins在多種組織中廣泛表達(dá)，其中nesprin-1、nesprin-2

2、主要在骨骼肌、心肌的肌小節(jié)中呈高表達(dá)。有研究表明nesprin-1、nesprin-2在肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上有重要作用。在肌原細(xì)胞C2C 12分化成肌管過(guò)程中nesprin-1、nesprin-2亞細(xì)胞定位從大部分位于細(xì)胞核/核被膜轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)/肌節(jié)，表明nesprin-1、nesprin-2可能在肌肉分化過(guò)程中有特殊作用[3-7]。Nesprin-1、nesprin-2突變將導(dǎo)致埃德二氏肌營(yíng)養(yǎng)不良(EMDM，Emery-Dreifuss

3、 muscular dystrophy)，該病在心臟主要表現(xiàn)為傳導(dǎo)障礙的心肌病[2，8]。但是nesprin-1、nesprin-2在心臟發(fā)育中的表達(dá)及作用尚未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)觀察nesprin-1、nesprin-2在小鼠心臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)，以便進(jìn)一步認(rèn)識(shí)此蛋白家族在心臟發(fā)育過(guò)程中的作用。 目的：觀察nesprin-1、nesprin-2在心臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)，探討n(yōu)esprin-1、nesprin-2在心臟發(fā)育過(guò)程中的作用。

4、 方法 1.取小鼠胚胎(分別為孕12.5天(embryo 12.5，E12.5)、E14.5天、E16.5天、E18.5天)胚胎心臟以及新生鼠、成年鼠心臟，體視解剖顯微鏡下觀察心臟發(fā)育同時(shí)}玎巳染色觀察心臟形態(tài)學(xué)變化。 2.采用RT-PCR檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)nesprin-1、nesprin-2基因的mRNA的表達(dá)。 3.采用Western-bolt檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)nesprin-1的蛋白表達(dá)。 4.采用免

5、疫熒光檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)nesprin-1在心肌細(xì)胞的定位。 結(jié)果 1.小鼠E12.5天時(shí)，房間隔、室間隔開(kāi)始發(fā)育，同時(shí)房室瓣也開(kāi)始形成；E14.5天時(shí)，房間隔、室間隔已經(jīng)形成；E16.5天時(shí)房室瓣已經(jīng)形成；E16.5天和E18.5天時(shí)，心肌細(xì)胞增殖、變大，使心房和心室壁致密變厚；新生鼠心臟，心肌細(xì)胞增大使心室壁增厚，心臟體積隨小鼠生長(zhǎng)發(fā)育而增大；生后心肌細(xì)胞由胚胎時(shí)期的多邊形逐漸過(guò)渡到成年時(shí)期的短柱狀。 2.RT-P

6、CR結(jié)果顯示nesprin-1、nesprin-2在心臟發(fā)育過(guò)程中表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化。Nesprin-1基因mRNA在E12.5天心臟組織中表達(dá)已較明顯，其表達(dá)水平呈逐漸上調(diào)趨勢(shì)，在E16.5天和E18.5天時(shí)表達(dá)最高，隨后表達(dá)水平逐漸下調(diào)，到成年鼠時(shí)期表達(dá)最低。Nesprin-2基因mRNA在胚胎12.5天時(shí)表達(dá)已達(dá)最高，隨后表達(dá)水平逐漸下調(diào)，到成年鼠時(shí)期表達(dá)最低。 3.Western-blot結(jié)果顯示nesprin-1蛋白表達(dá)與

7、RT-PCR結(jié)果一致，在胚胎16.5天前呈逐漸上調(diào)趨勢(shì)，在16.5和18.5時(shí)表達(dá)最高，隨后又逐漸下調(diào)，成年鼠表達(dá)最低。 4.免疫熒光結(jié)果顯示nesprin-1在小鼠心臟發(fā)育的各個(gè)時(shí)期均有表達(dá)，主要分布在心肌細(xì)胞核被膜及其核周間隙。 結(jié)論：Nesprin-1、nespein-2在小鼠胚胎心臟發(fā)育過(guò)程中表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化，Nesprin-1、nespein-2表達(dá)高峰與心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)、心肌細(xì)胞增殖發(fā)育時(shí)期一致，因此，我們推測(cè)nespri