OsRhoGDI2過表達轉基因水稻T2代的鑒定和分析.pdf

1、植物ROP蛋白是高等植物特有的小GTP結合蛋白。作為信號通路中的分子開關， ROP的功能涉及細胞生長與細胞極性的建立、細胞骨架的動態(tài)調控、激素應答、抗逆等多種生物學過程，是近年來植物信號轉導研究的熱點之一。水稻OsRacD是從幼穗組織中分離的ROP基因，功能涉及水稻育性控制，但是作用機制尚不清楚。為此，前期已采用酵母雙雜交技術對其相互作用蛋白的編碼基因進行了篩選，本研究中的OsRhoGDI2就是其潛在相互作用蛋白之一。為鑒定OsRhoG

2、DI2基因的功能，以及與水稻生長發(fā)育的關系，本實驗室前期構建了植物過表達載體pCAMBIA1302-GFP-OsRhoGDI2，并采用農桿菌介導法轉化水稻胚性愈傷，并篩選轉基因水稻。
　　本文對OsRhoGDI2過表達轉基因水稻T2代進行了篩選和鑒定，采用PCR技術篩選陽性植株，采用RT-PCR和qRT-PCR檢測OsRhoGDI2基因的過表達水平，結果顯示，其中5個株系的過表達水平依次上調為13.35、9.69、3.40、5.8

3、9、2.69倍。
　　對水稻幼穗發(fā)育的分析顯示，在雌雄蕊形成期，OsRhoGDI2過表達轉基因水稻的小穗數量明顯較野生型多，呈密集分布，且分布屬于密集型；掃描電鏡觀察結果顯示，OsRhoGDI2過表達轉基因水稻的小穗大多呈現雄蕊發(fā)育畸形，呈干癟狀，雌蕊退化，或者發(fā)育遲緩等異常特征，提示OsRhoGDI2基因的過表達影響水稻花器官的發(fā)育。
　　對OsRhoGDI2過表達轉基因水稻生理指標的檢測顯示，分蘗數及葉綠素含量等表型同野

4、生型WT相比無較大差距，而株高、劍葉長寬則比野生型較大，說明OsRhoGDI2基因的過表達使水稻株型整體變大。
　　對OsRhoGDI2過表達轉基因水稻產量相關性狀的分析顯示，每穗總粒數雖然比野生型水稻多，但結實率普遍偏低，減少量約為34.89％；且轉基因水稻穗型長度平均比野生型植株增加量為4.49cm，說明了OsRhoGDI2基因的過表達對轉基因T2代水稻農藝學性狀產生顯著影響，使穗型變大，結實率降低。
　　本研究對篩選到