海洋巨大芽孢桿菌抑制黃曲霉毒素生物合成及其機制.pdf

1、黃曲霉是糧食作物在生長和貯存過程中存在的一種主要真菌。黃曲霉會產生毒性極強的黃曲霉毒素，影響人類和動物的健康，對農業(yè)、商業(yè)都產生極大的影響，并具有致癌、致突變、免疫抑制、致畸形等作用。世界各國投入了大量的人力和物力致力于黃曲霉毒素的降解等相關技術研究。生物防治的方法由于高效率、環(huán)境污染小、效果顯著而更受青睞。本研究利用從海洋中分離出的巨大芽孢桿菌抑制黃曲霉生長及黃曲霉毒素產生，并采用基因芯片分析的方法來檢測抑制黃曲霉形成黃曲霉毒素的基因

2、表達途徑，這對降低黃曲霉毒素含量的研究具有重要意義。
　　(1)分別在UF715133-1和Jinhua1012兩種花生仁上接種海洋巨大芽孢桿菌和黃曲霉共培養(yǎng)，測定海洋巨大芽孢桿菌對黃曲霉毒素的生物合成和基因表達的影響。提取黃曲霉毒素并用HPLC分析毒素含量，再用KEGG和qRT-PCR對基因進行分類和分析。結果表明，在實驗組Jinhual012和UF715133-1中，超過85％的黃曲霉毒素B1合成被抑制，還有一些編碼蛋白酶的基

3、因，如短鏈脫氫酶、非核糖體多肽合成酶等顯著下調。因此，從海洋中分離出的巨大芽孢桿菌可顯著抑制黃曲霉毒素在花牛仁上的合成，黃曲霉中多種基因的表達受到抑制，但這些基因在黃曲霉毒素生物合成中的作用尚未闡明，其作用機制還有待進一步深入研究。
　　(2)分別在PDB和MM兩種液體培養(yǎng)基，接種海洋巨大芽孢桿菌與黃曲霉共培養(yǎng)，測定海洋巨大芽孢桿菌對黃曲霉毒素的生物合成和基因表達的影響。提取黃曲霉毒素并用HPLC分析毒素含量，再用KEGG和qRT

4、-PCR的方法對基因進行分類和分析。結果表明，在PDB培養(yǎng)基和MM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的黃曲霉，所累積的黃曲霉毒素幾乎完全（分別減少99.75％和99.80％）被海洋巨大芽孢桿菌抑制了，生物量也分別比對照組生物量減少81.15％和74.67％。說明通過與海洋巨大芽孢桿菌共培養(yǎng)抑制了黃曲霉的生長，同時也抑制黃曲霉毒素的產生?；蛐酒瑪祿@示，在PDB和MM培養(yǎng)基實驗組，CPA生物合成的相關基因表達下調。
　　(3)本實驗從黃曲霉DNA選取3

5、段探針，分別在5'端進行生物素標記，DNA探針長度大約為400bp。海洋巨大芽孢桿菌在37℃搖床培養(yǎng)24小時進行增殖;再以高速離心收集上清液，經旋轉蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，用冷凍干燥器干燥，得到的粗提蛋白與PCR擴增后的生物素標記DNA探針相互作用，在非變性聚丙烯酰胺凝膠上進行凝膠電泳，后經電泳轉移，采用化學發(fā)光EMSA試劑盒，對BiotinDNA-蛋白質用化學發(fā)光底物檢測，確定結合位點。結果表明，探針3與海洋巨大芽孢桿菌代謝產物結合并出現遷移