豬MRPS18基因微環(huán)載體構(gòu)建及其真核表達(dá).pdf

1、線粒體核糖體蛋白(MRPS18)能夠通過干擾B細(xì)胞的通路使其永生化，人MRPS18基因的過表達(dá)能夠使大鼠胚胎成纖維細(xì)胞永生化。近年來人們采用各種方法誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，目前常用的方法是將外源性永生化基因?qū)爰?xì)胞后培養(yǎng)獲得。永生化細(xì)胞株可用于長(zhǎng)期制備或利用某個(gè)蛋白。載體是將目的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞的主要工具，與其他載體相比，微環(huán)載體既沒有細(xì)菌的復(fù)制原點(diǎn)，又不含抗性基因，而且表達(dá)綠色熒光蛋白，便于觀察跟蹤，具備轉(zhuǎn)染效率高，低免疫原性，體內(nèi)長(zhǎng)期表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)

2、，是一個(gè)高效的真核表達(dá)載體。本研究通過RT-PCR方法從豬肝臟組織中克隆了MRPS18基因片段，并將該基因片段與微環(huán)表達(dá)載體Minicircle進(jìn)行連接，構(gòu)建成微環(huán)載體Minicircle-MRPS18，然后轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，在細(xì)胞水平上檢測(cè)MRPS18的表達(dá)情況及其對(duì)細(xì)胞永生化的影響。結(jié)果表明，克隆的豬MRPS18基因長(zhǎng)度為800bp，編碼258個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子量為67.39kDa，等電點(diǎn)為4.84，且在腦、心、肝、腎、脂肪、胃腸