肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1與TGF-β1-Smad信號通路的相關性研究.pdf

1、研究背景：肝硬化是一種常見的由不同病因引起的慢性、進行性、彌漫性肝病，而肝纖維化是肝硬化發(fā)生的前奏和必經中間環(huán)節(jié)?，F如今對肝纖維化肝硬化機制的研究已發(fā)展到分子生物學水平，但仍未完全闡明。轉化生長因子—β1(TGF—β1)是目前公認最強的促纖維化細胞因子之一，Smad3是介導TGF—β1誘導肝纖維化作用的關鍵信號轉導分子。胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBPs)的功能是國際上研究的熱點。Boers等運用基因表達序列分析方法(SAGE)來探

2、測人類和小鼠HSC轉化為肌成纖維細胞的過程中整個基因組轉錄的改變，結果顯示胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(IGFBPrP1)mRNA在轉化中期的肝星狀細胞(HSC)中表達最高。導師劉立新等發(fā)現IGFBPrP1在TGF—β1誘導的活化HSC中表達明顯增強，且抗IGFBPrP1抗體可以拮抗TGF—β1誘導HSC過表達的CollagenⅠ；肝纖維化肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1的表達較正常對照組明顯增強，且隨著病變程度的加重，其表達逐

3、漸增強；IGFBPrP1可激活HSC，且在一定劑量范圍內隨著IGFBPrP1劑量的增加HSC活化的程度逐漸增強。為探討IGFBPrP1在肝硬化形成過程中可能的作用及與TGF—β1/Smad3信號通路的關系，設計了本課題。 目的：探討IGFBPrP1在肝硬化患者肝組織中的表達及與TGF—β1/Smad3信號通路的關系。 方法：31例肝組織蠟塊來自于2002年1月-2007年12月山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院病理科。其中肝硬化

4、組16例，診斷符合“病毒性肝炎防治方案”；對照組15例，為手術切除肝血管瘤外正常肝組織(甲—戊型病毒性肝炎陰性)。蠟塊行5μm厚連續(xù)切片。按常規(guī)方法進行HE及Masson染色，免疫組織化學染色觀察肝組織中IGFBPrP1、TGF—β1及Smad3的表達，通過IPP軟件對圖像進行半定量分析。同時收集肝硬化組16例患者的血清HA化驗結果。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數據統(tǒng)計，并對結果進行相關性分析。 結果： 1．HE染色結

5、果顯示：對照組肝細胞形態(tài)正常、排列整齊，肝小葉結構完整；肝硬化組小葉結構被破壞，形成假小葉，假小葉內肝細胞排列紊亂，可見細胞腫脹變性，匯管區(qū)有大量炎性浸潤和纖維組織增生，纖維間隔寬窄不等，并可見增生的小膽管。 2．Masson染色結果顯示：對照組僅在中央靜脈等血管壁有少量膠原沉積；肝硬化組在匯管區(qū)纖維組織大量沉積，纖維間隔向肝小葉結構內延伸，并包繞形成假小葉。肝硬化組較對照組膠原纖維的形成明顯增多，膠原纖維面密度值明顯升高(6.

6、347±1.353vs1.120±0.212，P＜0.01)。 3．免疫組織化學染色結果顯示：FGF—β1在正常對照組肝組織中少量表達于部分肝細胞胞漿及肝竇中，呈棕黃色著色；在肝硬化組肝組織中TGF—β1表達明顯增強，陽性細胞數增多，在纖維間隔、匯管區(qū)內的炎細胞、成纖維細胞、Kupffer細胞胞漿及肝竇內的星狀細胞和竇內皮細胞中呈棕黃色及棕褐色沉著。Smad3在正常對照組肝組織肝細胞胞漿表達較為廣泛，呈淺黃色沉積，肝竇及纖維間隔

7、內未見明顯表達；在肝硬化組，肝細胞胞漿著色增強，同時可見匯管區(qū)、纖維間隔及肝竇內星狀細胞胞漿有明顯表達。IGFBPrP1在正常肝組織見極少數肝細胞有陽性染色；在肝硬化組，肝竇內及纖維間隔內的肝星狀細胞，成纖維細胞，Kupffer細胞，以及纖維間隔周圍的少數肝細胞，有明顯的陽性染色。 4．免疫組織化學染色圖像分析結果顯示：TGF—β1、Smad3及IGFBPrP1在肝硬化患者肝組織中的表達較正常對照組均顯著增加(TGF—β1：39

8、00.04±742.05vs522.56±124.77，P＜0.01；Smad3：32083.22±8270.7vs5401.23±1470.07，P＜0.01；IGFBPrP1：37102.82±7449.23vs6597.85±2041.46，P＜0.01)。 5．肝組織IGFBPrP1的表達與肝組織膠原纖維的表達呈正相關(r值為0.880，P＜0.01)；肝組織IGFBPrP1的表達分別與肝組織TGF—β1的表達呈正相關(

9、r值為0.886，P＜0.01)；肝組織IGFBPrP1的表達分別與肝組織Smad3的表達呈正相關(r值為0.900，P＜0.01)；6．肝硬化組16例患者血清HA均明顯高于正常值(586.84±503.95)，肝硬化患者肝組織IGFBPrP1的表達與血清HA的表達呈正相關(r值為0.524，P＜0.05)。 結論： 1.肝硬化患者肝組織IGFBPrP1、TGF—β1、Smad3的表達比正常對照組明顯上調，且肝組織IGF