射干異黃酮類成分的質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、本課題以射干藥材為研究對(duì)象，在文獻(xiàn)總結(jié)的基礎(chǔ)上，通過比較索氏提取、熱回流提取、超聲提取，微波提取等四種提取方式，選取微波提取技術(shù)對(duì)射干異黃酮類成分進(jìn)行制備，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了提取參數(shù)；通過HPLC-DAD/ESI-MS/MS技術(shù)分離并定性鑒別了射干藥材中9種主要的異黃酮類成分；采用高速逆流色譜技術(shù)及二維柱切換制備液相色譜技術(shù)對(duì)射干藥材中主要的異黃酮類成分進(jìn)行了制備；最后對(duì)16種不同產(chǎn)地的射干藥材進(jìn)行高效液相色譜指紋圖譜比較及

2、其9種主要異黃酮類成分的定量分析。 具體內(nèi)容如下： 一、射干異黃酮類成分的提取與含量測(cè)定 通過比較索氏提取、熱回流提取、超聲提取，微波提取四種提取方式，證實(shí)微波和超聲提取異黃酮類成分提取率結(jié)果相近，且明顯高于熱回流和索氏提?。晃⒉ㄌ崛r(shí)間大大少于超聲提取時(shí)間，因此對(duì)微波提取中的提取溶劑、固液比、提取時(shí)間及提取溫度進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，正交設(shè)計(jì)的均值及方差分析得出的最佳提取工藝條件為6

3、0％乙醇，乙醇用量為藥材的12倍，提取溫度75℃，提取10min。 二、射干異黃酮類化學(xué)成分的LC-DAD/ESI-MS/MS分析 采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)．串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)射干藥材中異黃酮類化學(xué)成分進(jìn)行快速定性鑒識(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：通過對(duì)色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化，使射干藥材中9種主要的異黃酮類化合物在60min內(nèi)達(dá)到基線分離。根據(jù)供試品的總離子流圖，并與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及質(zhì)譜資料比對(duì)，初步鑒識(shí)射干藥材中9種異黃酮類化合物分別

4、為鳶尾苷、鳶尾新苷、野鳶尾苷、Irilin D、鳶尾苷元、鳶尾新苷元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素、白射干素。 三、高速逆流色譜法分離制備射干藥材中5種異黃酮類成分 建立高純度制備射干藥材中5種異黃酮類成分的高速逆流色譜方法，利用高速逆流色譜兩種不同的分離體系分別制備得到2種異黃酮苷和3種異黃酮苷元。第一次高速逆流色譜分離的溶劑體系及體積比為正己烷：正丁醇：甲醇：水=1：4：1.5：6，分取上、下相，下相為流動(dòng)相，轉(zhuǎn)速為85

5、0rpm，流動(dòng)相速度為1.5mL/min，800mg射干藥材微波提取物溶于60mL下相中，分四次連續(xù)進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器圖譜接收目標(biāo)化合物。隨后對(duì)第一次高速逆流色譜分離體系中主要含有鳶尾苷元的固定相液進(jìn)行回收，并應(yīng)用氯仿：甲醇：水=4：2.7：2溶劑體系進(jìn)行第二次高速逆流色譜分離制備，轉(zhuǎn)速為860rpm，流動(dòng)相速度為2.0mL/min，根據(jù)檢測(cè)器圖譜接收目標(biāo)化合物。最終得到了鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾苷元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素5種異黃酮類化

6、合物單體。 四、射干異黃酮類化合物的二維柱切換制備液相色譜法研究 以六通切換閥代替?zhèn)鹘y(tǒng)定量蓄積環(huán)，使得從一維到二維的切割體積不再受定量環(huán)容積的限制，擴(kuò)大了方法的應(yīng)用范圍；同時(shí)保證樣品組分在二維色譜柱之間100％的切換率，極大地提高了分離的效率。當(dāng)加大進(jìn)樣量時(shí)，在一維制備柱中難以與干擾組分分離的鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素在線切換到第二維制備柱中進(jìn)行分離，結(jié)合連續(xù)進(jìn)樣大幅度減少單次分離制備的消耗時(shí)間和消耗溶劑

7、，從而建立了射干藥材中5種主要異黃酮類化學(xué)成分分離純化的HPLC-HPLC高效、快速在線分析制備技術(shù)。從1.5g射干藥材微波提取物中獲得鳶尾苷87.2mg，野鳶尾苷108.9mg，鳶尾苷元24.2mg，野鳶尾黃素81.8mg和次野鳶尾黃素53.7mg。經(jīng)HPLC純度分析檢測(cè)結(jié)果可知5種異黃酮類化合物單體的純度均大于98.6％。 五、不同產(chǎn)地的射干藥材中異黃酮類成分的含量測(cè)定 建立了高效液相色譜同時(shí)測(cè)定射干藥材中9種異黃酮