羊附紅細(xì)胞體PCR診斷方法的建立和豬附紅細(xì)胞體病的治療試驗(yàn).pdf

1、附紅細(xì)胞體病是由附紅細(xì)胞體(Eperythrozoon)寄生于多種動(dòng)物的紅細(xì)胞表面、血漿及骨髓中引起的一種人畜共患病。關(guān)于附紅細(xì)胞體的分類地位目前仍有爭(zhēng)議，傳統(tǒng)的分類學(xué)方法將附紅細(xì)胞體列為立克次氏體，但是近年來(lái)根據(jù)16S-rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果表明，附紅細(xì)胞體更接近于支原體(Mycoplasma)。 直接鏡檢是目前臨床上診斷該病的主要手段，包括鮮血壓片和涂片染色，但該方法假陽(yáng)性較多見(jiàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也是確診的手段之一，但所費(fèi)

2、時(shí)間太久。血清學(xué)診斷方法包括間接血凝試驗(yàn)(IHA)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等，但由于附紅細(xì)胞體抗體水平的變化沒(méi)有規(guī)律而常出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。鑒于上述原因，為了建立特異準(zhǔn)確的診斷方法，本研究首先進(jìn)行了羊附紅細(xì)胞體病的PCR診斷方法的研究。 為建立特異、敏感、快速的羊附紅細(xì)胞體診斷方法，利用原核生物16S rRNA基因通用引物擴(kuò)增羊附紅細(xì)胞體16S rRNA基因序列，并進(jìn)行序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析。根據(jù)

3、所測(cè)得的羊附紅細(xì)胞體16S rRNA基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)種特異性引物，建立了羊附紅細(xì)胞體的PCR診斷方法。特異性試驗(yàn)和敏感性試驗(yàn)表明，此診斷方法只能特異性地?cái)U(kuò)增羊附紅細(xì)胞體的16S rRNA基因序列的特異性片段，檢測(cè)羊附紅細(xì)胞體最低DNA量為4.5fg。利用該方法對(duì)湖北省羊附紅細(xì)胞體感染情況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示陽(yáng)性感染率為17.48％，說(shuō)明羊附紅細(xì)胞體在湖北省的流行情況比較廣泛。 為了驗(yàn)證新藥二丙酸咪唑苯脲對(duì)豬附紅細(xì)胞體病

4、的治療效果，本試驗(yàn)以PCR檢測(cè)陽(yáng)性的斷奶仔豬為對(duì)象，注射免疫抑制劑誘導(dǎo)發(fā)病后進(jìn)行治療，試驗(yàn)設(shè)二丙酸咪唑苯脲高中低劑量組，血蟲(chóng)凈治療組，陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組，結(jié)果證明二丙酸咪唑苯脲在2.0mg/kg劑量時(shí)，對(duì)附紅細(xì)胞體有一定的抑制和殺滅作用，效果最好，優(yōu)于血蟲(chóng)凈。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為臨床應(yīng)用二丙酸咪唑苯脲治療豬附紅細(xì)胞體病提供了重要依據(jù)。 近幾年來(lái)，國(guó)內(nèi)有關(guān)豬病的報(bào)道似乎以豬附紅細(xì)胞體病為多，凡遇到高燒、黃疸、皮膚發(fā)紅等情況往往都以附

5、紅細(xì)胞體病定論。在調(diào)查和防治工作中血液涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)了一種異常現(xiàn)象，血液中存在一種新的疑似病原，有人暫命名為“豬血鞭毛蟲(chóng)病”。該疑似病原體存在于病豬血液中，有多種形態(tài)，其中典型的呈紡錘形、兩極長(zhǎng)有鞭毛。病豬的臨床癥狀類似于豬附紅細(xì)胞體病。隨著病情的發(fā)展，常在發(fā)生區(qū)域流行蔓延，病豬對(duì)早期用過(guò)的一些治療藥物耐受或產(chǎn)生抗藥性，嚴(yán)重影響了一些農(nóng)村地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。為此，本試驗(yàn)對(duì)該病的病原學(xué)、臨床表現(xiàn)等進(jìn)行了研究，并探討了該病的治療方法，為揭示這一