水黃皮質(zhì)量標準及其提取物安全性評價研究.pdf

1、目的：從水黃皮的生藥學和含量測定研究入手,建立其質(zhì)量標準：篩選水黃皮根總黃酮提取與純化方法,并對其提取物(水黃皮根總黃酮)進行安全性評價研究。
　　 方法：(1)采用性狀鑒定、顯微、理化、薄層鑒別(TLC)以及紫外吸收光譜(UV)等方法對水黃皮進行系統(tǒng)的生藥學研究；(2)采用UV和高效液相色譜法(HPLC)分別測定水黃皮藥材中總黃酮和水黃皮素的含量；(3)采用單因素試驗與正交設計試驗優(yōu)選水黃皮根總黃酮最佳提取工藝條件,并采用大孔

2、吸附樹脂對其提取物進行純化；(4)采用Bliss法PRF進行小鼠急性毒性試驗研究:昆明小鼠一天內(nèi)經(jīng)口單次給予PRF,連續(xù)觀察14天,觀察PRF對動物產(chǎn)生的毒性反應、體重變化及動物死亡情況,并計算LD50及其95％可信限；(5)觀察不同劑量的PRF對SD大鼠連續(xù)灌胃90d,恢復期觀察14天,期間測量大鼠體重、攝食量、血液學和血液生化學指標,計算臟器系數(shù),并進行病理學檢查。
　　 結果：(1)提出了水黃皮藥材性狀和顯微鑒別特征；理化

3、鑒別顯示水黃皮含有黃酮類和三萜類化合物；薄層鑒別顯示水黃皮藥材含有水黃皮素；紫外.可見光譜掃描顯示水黃皮藥材水提液在200 nm～400nm波長范圍內(nèi)無吸收,60％乙醇提取液在260和303nm處有最大吸收,氯仿提取液在244和322nm處有最大吸收；(2)UV法測得水黃皮根中總黃酮含量為1.05％；HPLC法測的水黃皮根中水黃皮素含量分別為0.164％；(3)水黃皮根總黃酮最佳提取工藝為:每g藥材粗粉加入20倍量60％乙醇,于80℃回

4、流提取3次,每次1.0 h。大孔吸附樹脂純化PRF結果為:D101最適于水黃皮總黃酮的純化,最佳工藝為:調(diào)節(jié)水黃皮根提取液總黃酮濃度約為0.6mg.mL-1,調(diào)pH=3,以2mL·min-1的流速上樣,以相同速率用適量純化水洗脫(molish反應陰性)后,再用3BV20％乙醇溶液除雜洗脫,最后用70％乙醇作為洗脫劑進行洗脫,純化后總黃酮含量可達50％以上；(4)按Bliss法求得PRF小鼠灌胃的LD50為3.3016 g/kg,其95％

5、的可信限為2.8895 g/kg～3.7953 g/kg。對死亡小鼠立即進行解剖,肉眼觀察主要臟器均未見出血等異?，F(xiàn)象。對各組存活小鼠逐日觀察2周,其外觀特征、毛色、行為活動、飲食、精神狀態(tài)、糞便性狀等在給藥次日恢復正常,試驗結束時,小鼠體重明顯增長。(5)長毒研究表明,PRF對大鼠體重和攝食量無明顯影響,大鼠臟器系數(shù)、血液學指標有部分變化,但在恢復期結束后基本恢復正常。肝臟、腎臟、心臟、子宮和前列腺等可見充血和炎細胞浸潤等病理改變。<

6、br>　　 結論：(1)建立了水黃皮藥材的顯微、TLC和紫外光譜掃描等鑒別方法。(2)建立了UV法測定水黃皮根中總黃酮和HPLC法測定水黃皮根中水黃皮素含量的方法,兩種方法穩(wěn)定性和重復性較好,可用于水黃皮藥材的質(zhì)量控制。(3)優(yōu)選出了水黃皮根總黃酮提取純化工藝,經(jīng)純化后總黃酮含量大于50％,可達到純化的目的。(4)PRF小鼠急性毒性試驗LD50為3.3016g/l(g,主要臟器未見明顯病變,亦未見遲發(fā)型毒性反應。(5)PRF大鼠3個月