梨極矮化突變體PuRGL2基因克隆及矮化相關(guān)基因的表達(dá)分析.pdf

1、本試驗(yàn)以梨極矮化突變體為試材，用不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植株進(jìn)行處理，采集處理與對(duì)照葉片提取總RNA，利用PCR擴(kuò)增及克隆，基因測(cè)序等技術(shù)克隆梨極矮化突變體編碼DELLA蛋白基因PuRGL2,并進(jìn)行半定量RT—PCR基因表達(dá)測(cè)定，推測(cè)梨極矮化突變體的類型，應(yīng)用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)分析梨矮化突變體與延邊地區(qū)栽培的小香水梨等梨品種的親緣關(guān)系，推測(cè)其親本。主要結(jié)果如下：
　　外源噴施不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)梨極矮化突變體有一定的影響，經(jīng)過(guò)赤霉

2、素處理植株的在總生長(zhǎng)量上與凈生長(zhǎng)量都與對(duì)照存在差異，其中250mgL-1的赤霉素處理效果最顯著，在處理后35天開(kāi)始與對(duì)照出現(xiàn)顯著差異。而梨極矮化突變體對(duì)生長(zhǎng)素不敏感，噴施 IAA并未促進(jìn)節(jié)間伸長(zhǎng)。初步推測(cè)梨極矮化突變體是GA缺陷型突變體。
　　以梨極矮化突變體的cDNA為模板，成功克隆出一個(gè)具有典型DELLA蛋白結(jié)構(gòu)的基因--PuRGL2，基因全長(zhǎng)為1755bp，包含一個(gè)完整的編碼584個(gè)氨基酸的ORF。PuRGL2與短枝型蘋果的

3、MdRGL2b基因和蘋果的RGL2b基因的mRNA編碼序列的同源性最高，達(dá)99％，與蘋果RGL2a基因，短枝型蘋果的MdRGL2a基因和湖北海棠的GAI2基因的mRNA編碼序列的同源性也較高，達(dá)98%，并成功構(gòu)建雙元表達(dá)載體。
　　通過(guò)半定量PCR測(cè)定GA20氧化酶，PuRGL1和PuRGL2基因表達(dá)量，結(jié)果表明在不同激素處理的植株體內(nèi)GA20的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于PuRGL1和PuRGL2的基因表達(dá)量，說(shuō)明梨極矮化突變體的矮化可能與G