犬弓首線蟲感染期幼蟲mucin5基因的克隆、表達(dá)及其免疫特性的初步研究.pdf

1、目的：克隆并表達(dá)犬弓首線蟲感染期幼蟲粘蛋白(Tc-MUC-5)編碼基因,初步研究重組Tc-MUC-5純化蛋白的免疫學(xué)特性方法孵育犬弓首線蟲的感染期幼蟲,提取總RNA。方法：利用美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的相關(guān)信息,設(shè)計該基因的特異性引物,RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增犬弓首線蟲感染期幼蟲粘蛋白基因Tc-MUC-5,與已知序列進(jìn)行同源性比較后,插入原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)中。重組質(zhì)粒在大腸埃希菌BL21(DE3)中轉(zhuǎn)化,經(jīng)IPTG

2、誘導(dǎo)表達(dá)的產(chǎn)物經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定,用鎳離子金屬螯合劑(Ni-IDA)親和層析純化表達(dá)產(chǎn)物。WesternBlotting分別檢測用純化的重組蛋白免疫SD大鼠后所獲得的血清及被犬弓首線蟲感染期幼蟲所感染的小鼠、兔的血清。結(jié)果：重組質(zhì)粒pET-28a(+)-Tc-MUC-5構(gòu)建成功,IPTG誘導(dǎo)獲得可溶性表達(dá)的重組蛋白。經(jīng)親和層析獲得了高純度蛋白。重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識別;同時,也能被感