針刺促進五味子肝趨向性效應的研究.pdf

1、中醫(yī)歷史上，一直有針藥并用、雜合以治的觀點。《內(nèi)經(jīng)》從理論上對針藥結(jié)合進行了初步的總結(jié)，提出針藥各有所宜、針藥結(jié)合相須為用的學術(shù)觀點，對后世產(chǎn)生了深遠的影響。唐代孫思邈積極倡導針藥兼用，從臨床角度要求醫(yī)生掌握針灸和藥物兩種治療方法，達到相須為用的境界?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)通過針藥結(jié)合，能產(chǎn)生新的更有利于各自作用發(fā)揮的因素。針灸調(diào)動機體內(nèi)各種因素參加機體平衡的恢復過程，為藥物的作用提供較好的基礎狀態(tài)（增加靶向性、提高藥物與靶器官的親和力），有利于

2、協(xié)同發(fā)揮機體平衡的恢復作用。
　　 五味子為木蘭科(Magnoliaceae)多年生落葉木質(zhì)藤本植物[Schisandrachinensis(turcz.)baill.]的成熟果實。五味子果實味酸、甘，性溫。具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效。臨床常用于治療無黃疸型肝炎及慢性遷延性肝炎等肝部病癥，同時用于保肝護肝，其效用為臨床所驗證。研究顯示：五味子醇提物及五味子乙素、醇甲等成分對化學毒物引起的動物肝細胞損傷有明顯保護作用，

3、可抑制轉(zhuǎn)氨酶的釋放，使ALT活性降低；能明顯誘導小鼠和大鼠肝微粒體細胞色素P-450活性，增加肝臟解毒能力；五味子對CCl4經(jīng)肝微粒體代謝轉(zhuǎn)化后生成的一氧化碳及其在代謝過程中對NADPH的消耗亦能有抑制作用；五味子有助于肝細胞蛋白質(zhì)的合成，從而使線粒體恢復和增加，相應的酶活性增高，肝細胞得以恢復和再生，發(fā)揮降酶保肝作用。
　　 近年來。國內(nèi)一些學者認為，每個穴位都有之相聯(lián)系的特定的器官系統(tǒng)。當該穴位受刺激后，只有與之相聯(lián)系的特定

4、器官系統(tǒng)會受到更大的影響。有研究發(fā)現(xiàn)針刺“內(nèi)關(guān)”和“太沖”兩穴能明顯增加心臟和肝臟中川芎嗪的含量。足三里穴位和肝臟關(guān)系密切，目前大多文獻還是集中在針灸保肝護肝的作用，對機制研究較少，如電針“足三里”等穴位能有效的保護四氯化碳、內(nèi)毒素、酒精中毒、肝臟缺血等所致的大鼠肝損傷，效果較突出。
　　 本研究以五味子為研究對象，分析針灸與其聯(lián)用后效應物質(zhì)基礎的變化，系統(tǒng)開展肝靶向性分布、P450代謝酶活性、膽汁排泄等研究。闡明針灸能增強五味

5、子的肝趨向性與效應物質(zhì)基礎變化的相關(guān)性，從細胞和分子水平對針藥結(jié)合進行生物藥劑學與藥物動力學等研究，以創(chuàng)新性建立針藥結(jié)合增強藥物作用效應理論的研究方法，為針灸促進藥物趨向性理論研究建立科學的評價體系。
　　 本研究主要包括以下內(nèi)容：
　　 將小鼠分為空白組、模型組、陽性組、先針后藥組、針藥同時進行組和單給藥組。除了空白外和模型組外注射CCl4橄欖油溶液造成急性肝損傷。17h后摘除一側(cè)眼球取血，分離血清，測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)

6、移酶(AST)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活力。結(jié)果表明：經(jīng)五味子和針刺治療，AST及ALT值明顯降低，先針后藥組，單給藥組，針藥同時進行組對小鼠的急性肝損有明顯保護作用，而且針藥同時進行組效果最好。同時針藥同時進行結(jié)合的實驗方法操作更簡便，需要時間的更少，效率更好，因此以后的針灸方法為針藥同時進行。
　　 取針藥結(jié)合的SD大鼠，給藥前采血作為空白樣品，在灌胃給藥后繪制的一個完整的血藥濃度-時間曲線，包括藥物的吸收相、平衡相和消

7、除相。整個采樣時間至少應持續(xù)到3～5個半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/10～1/20。采用LC-MS/MS儀測定血藥濃度。然后采用中國藥理學會推薦DAS軟件進行數(shù)據(jù)處理。將試驗中測得的各受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)分別進行藥物動力學參數(shù)的估算，計算標識成分的藥物動力學參數(shù)，包括有：Ka、Tmax（實測值）、Cmax（實測值）、AUC（梯形法求算）、Vd、Kel、t1/2和CL等。大鼠給藥后，以藥時曲線作參考，選3個時間點分別代表

8、分布相、平衡相和消除相的藥物分布。測定藥物在心、肝、脾、肺、腎等組織的濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)木脂素的藥時曲線亦呈開放型二室模型，具有二次吸收。五味子木脂素成分在大鼠各臟器分布中最多的是肝，其次是肺和腎。結(jié)果表明五味子中的木質(zhì)素成分在經(jīng)過針灸后具有一定的肝靶向性。
　　 將針藥結(jié)合的大鼠處死取出肝臟，超速離心法制備肝微粒體，Lowery法進行微粒體蛋白含量測定繪制標準曲線。采用CO還原差示光譜法測定P450酶的含量。結(jié)果顯示，大鼠肝微粒體

9、CYP450水平均顯著提高，其對丙咪嗪的體外代謝速率顯著加快。結(jié)果表明五味子對大鼠CYP450有誘導作用，且與劑量或誘導時間有關(guān)，并且針灸增加了這種效應。
　　 取清潔級SD大鼠禁食12h后進行實驗，給大鼠腹腔注射烏拉坦麻醉，右頸動脈插管，并沿腹白線于劍突下劃開腹部肌層約1cm做膽管插管，最后切開左腿皮膚暴露股靜脈待其呼吸平穩(wěn)后給藥取血，收集膽汁。膽汁樣品于給藥前和給藥后不同時間點收集，比較單給藥組和針藥結(jié)合組的膽汁收集量。結(jié)果

10、顯示經(jīng)過針藥結(jié)合的大鼠膽汁最多，其次是單給藥組。以上結(jié)果顯示，針藥結(jié)合比單給藥組更能增強膽汁排泄。
　　 綜上所述，本研究論文以五味子為研究對象，對經(jīng)過針灸“足三里”穴位后其主要有效成分木脂素成分進行肝損傷、組織分布及代謝排泄等方面的研究。建立了血漿和主要組織中檢測三種木脂素成分的HPLC-MS分析方法，結(jié)果表明，五味子經(jīng)過針灸“足三里”穴位聯(lián)用后，能有效保護四氯化碳所致的肝損傷，促進有效成分在主要組織的分布，增強P450酶的誘