氨甲喋呤對(duì)映體對(duì)細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 1.探討氨甲喋呤對(duì)映體((+)MTX、(-)MTX)對(duì)ECV304,A549，HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用及誘導(dǎo)凋亡實(shí)驗(yàn)研究。
　　 2.快速靈敏的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定氨甲喋呤對(duì)映體作用HepG2后，藥物在細(xì)胞內(nèi)外液中的濃度。
　　 方法：
　　 1.采用培養(yǎng)的ECV304，HepG2，A549細(xì)胞，應(yīng)用MTT比色法分析MTX對(duì)映體的活性。
　　 2.用倒置顯微鏡觀察ECV304，

2、HepG2，A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　 3.碘化丙啶(PI)單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ECV304，HepG2，A549的細(xì)胞周期。
　　 4.熒光顯微鏡DAPI觀察A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化及凋亡。
　　 5.DNA梯度電泳檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　 6.異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(V-FITC/PI)雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HepG2凋亡。
　　 7.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定MTX對(duì)映體在細(xì)胞內(nèi)外液中的濃度。

3、r>　　 結(jié)果：
　　 1.在0.1μmol·L-1～150μmol·L-1范圍內(nèi)，(+)MTX和(-)MTX作用于ECV304，HepG2，A549細(xì)胞24、48、72h，均抑制細(xì)胞ECV304，HepG2，A549增值，但抑制強(qiáng)度為(+)MTX＞(-)MTX。
　　 2.倒置顯微鏡觀鏡察不同濃度(+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2，A549細(xì)胞不同時(shí)間后，出現(xiàn)細(xì)胞不同程度的形態(tài)學(xué)改變，且(+)MT

4、X作用的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變強(qiáng)于(-)MTX。
　　 3.(+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2和A549細(xì)胞，PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ECV304，HepG2，A549細(xì)胞周期的影響，表明氨甲喋呤對(duì)映體均干擾ECV304，HepG2，A549細(xì)胞DNA合成且出現(xiàn)不同程度的凋亡峰。
　　 4.熒光顯微鏡DAPI染色察不同濃度(+)MTX和(-)MTX作用A549細(xì)胞不同時(shí)間后，出現(xiàn)細(xì)胞不同程度的形態(tài)學(xué)改變，有凋亡

5、小體產(chǎn)生。
　　 5.DNA梯度電泳檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)MTX作用組有凋亡條帶出現(xiàn)，其中(+)MTX最為明顯。
　　 6.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的凋亡。
　　 7.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2細(xì)胞后，測(cè)得(+)MTX在細(xì)胞內(nèi)濃度高于(-)MTX。
　　 結(jié)論：
　　 (+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2，A549細(xì)胞后，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋