肝癌細胞微球體培養(yǎng)對干細胞相關(guān)蛋白表達的影響.pdf

1、目的: 研究肝癌細胞系 LM3經(jīng)微球體培養(yǎng)后對干細胞相關(guān)蛋白Oct-4、Sox2、Wnt-5b、Nanog表達的影響，同時對微球體的特征進行鑒定,為肝癌干細胞的研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法: 應(yīng)用干細胞培養(yǎng)體系和微球體懸浮培養(yǎng)法從肝癌細胞系LM3中富集到微球體，并對微球體進行一系列的特征鑒定。包括：（1）微球體形成時間及大?。唬?）蛋白質(zhì)免疫印跡及免疫熒光檢測LM3細胞與微球體細胞中干細胞相關(guān)蛋白Oct-4、Sox2、Wnt-5b

2、、Nanog表達；（3）蛋白質(zhì)免疫印跡檢測LM3細胞與微球體細胞中p-ERK1/2、ERK1/2、p-AMPK、AMPK表達；（4）蛋白質(zhì)免疫印跡檢測 LM3細胞與微球體細胞中 EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表達，免疫熒光檢測LM3細胞與微球體細胞中EMT相關(guān)蛋白E-cadherin表達；（5）MTT實驗檢測LM3細胞與微球體細胞對阿霉素耐受能力；（6）劃痕實驗檢測LM3細胞與微球體細胞遷移能

3、力；（7） NOD／SCID小鼠皮下成瘤實驗檢測LM3細胞與微球體細胞成瘤能力。
　　結(jié)果: （1）干細胞培養(yǎng)體系和微球體懸浮培養(yǎng)法可以使肝癌細胞快速形成微球體，培養(yǎng)至第7天時，微球體的直徑可以達到450μm；（2）蛋白質(zhì)免疫印跡檢測及免疫熒光檢測結(jié)果顯示微球體細胞中干細胞相關(guān)蛋白Oct-4、Sox2、Wnt-5b、Nanog的表達量均高于LM3細胞（P<0.01或P<0.05）；（3）蛋白質(zhì)免疫印跡檢測結(jié)果顯示微球體細胞中p-E

4、RK1/2、ERK1/2的表達量高于LM3細胞（P<0.001），p-AMPK、AMPK的表達量低于LM3細胞（P<0.001）；（4）蛋白質(zhì)免疫印跡檢測結(jié)果顯示微球體細胞中E-cadherin的表達量高于LM3細胞（P<0.05），N-cadherin、Vimentin的表達量低于LM3細胞（P<0.001或P<0.05）；免疫熒光檢測結(jié)果顯示微球體細胞中E-cadherin的表達量高于LM3細胞；（5）MTT實驗檢測結(jié)果顯示微球體細

5、胞耐受阿霉素的能力比 LM3細胞強（P<0.05）；（6）劃痕實驗檢測結(jié)果顯示微球體細胞的遷移能力比LM3細胞強（P<0.01）；（7）NOD／SCID小鼠皮下成瘤實驗檢測結(jié)果顯示微球體細胞的成瘤能力比LM3細胞強。
　　結(jié)論: 干細胞培養(yǎng)體系和微球體懸浮培養(yǎng)法可以使肝癌細胞系LM3快速形成微球體，微球體細胞中干細胞相關(guān)蛋白Oct-4、Sox2、Wnt-5b、Nanog的表達量均增高，p-ERK1/2、ERK1/2的表達量增高,