異丙酚麻醉對小鼠腦內GABA能神經元激活作用的研究.pdf

1、全身麻醉的發(fā)展已有160多年的歷史，但全身麻醉的機理仍然不甚明了。尤其是全身麻醉的中樞機制，一直是麻醉學領域的研究重點和熱點。
　　近年來，異丙酚由于起效快、清除迅速和不良反應少等優(yōu)點而被廣泛應用于臨床麻醉。但異丙酚作用于中樞神經系統(tǒng)的機制尚未完全闡明。離體和在體實驗均表明異丙酚能增強GABA與GABAA受體的結合，增強抑制性突觸后電流，從而達到麻醉的效果。但就其對突觸前機制的研究甚少，異丙酚是否對GABA能神經傳遞的突觸前神經元

2、—GABA能神經元也有一定的作用將是本實驗的重點。
　　研究目的：觀察異丙酚麻醉過程中谷氨酸脫羧酶67-綠色熒光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠腦內Fos蛋白及GABA能神經元的活化情況，以了解突觸前神經元在全麻機理中的可能作用，為闡明靜脈麻醉藥中樞神經系統(tǒng)的作用靶位及機制提供資料。
　　研究方法：成年雄性GAD67-GFP基因敲入小鼠20只（第四軍醫(yī)大學基礎部人體解剖學教研室提供）隨機分為2組：C組（CGroup）：

3、對照組，腹腔注射生理鹽水；T組（TGroup）：實驗組，又分為三個亞組T1（5min），T2（30min），T3（1h）。采用腹腔注射異丙酚（130mg/kg）麻醉，分別在注射后5min，30min，1h進行行為學評分，按照評分標準打分，評價其麻醉狀態(tài)。隨后立即處死并取腦，制取腦薄片（片厚30μm），分套收集，應用免疫組織化學觀察神經元活化標記物Fos在全腦的表達分布情況。用上述制備待用的腦薄片，進行GABA能神經元與Fos的免疫熒光雙

4、標染色。
　　研究結果：
　　1、行為學結果：在腹腔注射異丙酚后5min、30min和1h時行為學評分分別為5min時13分，30min時14分，1h時9分，表明5min和30min均能達到適度或深度麻醉效果，而1h時則處于過渡狀態(tài)。
　　2、對GAD67-GFP基因敲入小鼠腦內Fos蛋白表達的觀察：與對照組相比，F(xiàn)os在海馬CA1、杏仁核(MeA)、丘腦室旁核(PV)、下丘腦室旁核(PaV)、齒狀回(DG)、下丘腦腹

5、內側核(VMH)、中腦導水管周圍灰質(PaG)的表達在三個時間點都有明顯增加(P<0.05)，在嗅球外叢狀層(EPI)有表達但與對照組相比無明顯差異(P>0.05)。
　　3、對GAD67-GFP基因敲入小鼠腦內GABA和Fos蛋白共存表達的觀察：腹腔注射異丙酚后5min、30min和1h下丘腦腹內側核有GABA與Fos共存，共存的細胞占該區(qū)域Fos陽性神經元分別為：T1：80.3％，T2：89.7％，T3：91.6％，C：24.