I-TAC在神經(jīng)退行性病變中免疫調(diào)節(jié)作用的體外研究.pdf

1、目的:用體外實驗研究CXC家族趨化因子I-TAC在小膠質(zhì)細胞上的表達及其影響因素，同時觀察I-TAC對原代T細胞的增殖、分化、黏附分子表達及趨化作用的影響，從而探討I-TAC在神經(jīng)系統(tǒng)退行性變中可能發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法:用LPS刺激小鼠小膠質(zhì)細胞株N9，分別加入A β 42、TNF-α、DEX以及特異性 TLR4抗體，采用RT-PCR半定量分析檢測I-TAC mRNA的表達，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測TLR2、TLR4在N9表面的

2、表達。用尼龍毛分離純化小鼠原代T細胞，加I-TAC培養(yǎng)，用ELISA檢測培養(yǎng)上清中的IFN-Y和IL-4濃度。采用微孔隔離室遷移實驗觀察I-TAC對T細胞的趨化作用。原代T細胞及N9細胞在I-TAC刺激下的增殖實驗采用MTT法。應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測黏附分子CDlla在T細胞表面的表達。 結(jié)果: 1、LPS與Aβ 42均能誘導(dǎo)的N9細胞表達I-TAC mRNA；TNF-α能顯著增加LPS誘導(dǎo)的I-TAC mRNA表達，DEX

3、則降低其表達。 2、N9細胞在LPS刺激前后均可表達TLR2及TLR4膜分子。在細胞培養(yǎng)中加入抗-TLR4抗體，I-TAC的表達量顯著降低。 3、重組I-TAC對小鼠T細胞產(chǎn)生Th1型細胞因子IFN-γ的增加占顯著優(yōu)勢。在趨化實驗中T細胞的遷移指數(shù)的增加呈I-TAC劑量依賴性，I-TAC濃度在200 ng/ml時遷移指數(shù)達4.964±1.398。在T細胞增殖實驗中，與對照組相比，I-TAC使OD值顯著增高；但在N9細胞增

4、殖實驗中I-TAC卻使OD值顯著下降。流式細胞技術(shù)檢測顯示I-TAC以劑量依賴的形式顯著增加CDlla(LAF-1)陽性T細胞的百分比。 結(jié)論: 1、LPS、TNF-α、Aβ42能夠誘導(dǎo)N9細胞表達I-TAC mRNA，其中TNF-α對 LPS的誘導(dǎo)作用具有協(xié)同效應(yīng)，而DEX則具有拮抗效應(yīng)。 2、LPS促進N9細胞表面表達TLR2、TLR4。TLR4介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)可能是I-TAC表達的重要依賴因素。 3、