尿毒癥血清和不同血液透析液對脂肪細胞凋亡及胰島素抵抗的影響.pdf

1、目的：在國內，常規(guī)血液透析液（conventional dialysate，CD）因其價格低廉，被廣泛用于臨床血液透析（hemodialysis，HD）中。然而，這種透析液可以增加血透患者細菌污染的風險，導致多種遠期并發(fā)癥。脂肪組織分布異常被認為是尿毒癥患者血管疾病的危險因素。在HD患者中存在逆流行病學觀點：即與低體質量患者相比，肥胖或較高體質量指數(shù)患者的病死率較低。已經(jīng)商品化的高純透析液（high purity dialysate ，

2、HPD）可以減少HD患者炎癥反應，改善其營養(yǎng)狀況。但是血透液對脂肪細胞的影響尚不清楚。本次研究主要在體外探討不同微生物純度的血透液對脂肪細胞凋亡及胰島素抵抗的影響。
　　 方法：分別用尿毒癥患者血清（Uremic Serum）聯(lián)合CD及HPD對經(jīng)體外誘導分化成熟的3T3-L1脂肪細胞進行干預，48h后收集細胞，Hoechst 33258染色觀察細胞凋亡形態(tài)學改變；流式細胞術Annexin V-FITC+碘化丙啶（PI）雙染檢測脂

3、肪細胞凋亡。PCR檢測CD和HPD中細菌DNA表達。ELISA法檢測血清中腫瘤細胞壞死因子α（TNF-α）水平。葡萄糖酶氧化法檢測細胞上清的糖消耗，Western Blot技術檢測胰島素底物受體IRS-1、IRS-2、IRS-1絲氨酸磷酸化的蛋白表達。實驗采用的透析液樣品皆取自透析器入口處。
　　 結果：兩組血液透析液在透析器入口的內毒素含量相似，與HPD組（7±3CFU/ml）相比，CD組細菌菌落計數(shù)較高(66±6CFU/ml

4、)，兩組差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。PCR檢測顯示，HPD中細菌DNA灰度表達少于CD（p<0.05）。尿毒癥血清（Uremic Serum）與兩種血透液聯(lián)合干預48h后，Uremic Serum+CD組脂肪細胞上清中TNF-α水平明顯高于Uremic Serum+HPD組（15.17±2.89 vs 8.12±0.54 pg/ml，p<0.0001），而脂肪細胞凋亡率Uremic Serum+CD組明顯高于Uremic Se

5、rum+HPD組（p<0.05），且此組細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學改變。同Uremic Serum+CD組相比，Uremic Serum+HPD組的IRS-1蛋白表達增強，IRS-1絲氨酸磷酸化表達減弱，IRS-2蛋白的表達也下降。
　　 結論：CD和Uremic Serum聯(lián)合干預可以誘導脂肪細胞凋亡，增加脂肪細胞的胰島素抵抗，并且可以增加炎癥因子TNF-α的分泌。以上結果提示：HPD在減少脂肪細胞凋亡，減輕胰島素抵抗及改善炎癥