日本血吸蟲SIEA26-28kDa單鏈抗體與人白介素18融合蛋白質粒的構建及表達.pdf

1、目的： 本研究旨在構建日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kDa單鏈抗體與人白介素18融合蛋白原核表達質粒，并通過大腸桿菌BL21菌株表達該融合蛋白，確定該融合蛋白的表達水平，探討利用單鏈抗體聯(lián)合白介素18進行日本血吸蟲病靶向免疫治療的可能性。 方法： 以pET32a/SIEA26-28kDa-EGFP-scFv和pGEM-T-CMV/IL18質粒為基礎，利用PCR技術從pGEM-T-CMV/IL18質粒中擴

2、增得到帶有特定酶切位點的IL-18全長基因片段，經(jīng)相應的限制性內切酶酶切該片段和pET32a/SIEA26-28kDa-EGFP-scFv質粒，分離并純化相應目的片段后，利用連接酶連接，轉化至感受態(tài)細胞，經(jīng)固體LB細菌培養(yǎng)基培養(yǎng)，挑取單克隆，純化質粒、鑒定克隆，獲得pET32a/SIEA26-28kDa-IL18-scFv質粒；將該質粒轉染至大腸桿菌BL21菌株，通過IPTG誘導表達融合蛋白IL18-scFv，同時表達EGFP-scFv

3、融合蛋白，觀察該融合蛋白的表達水平；并用Western-blot鑒定該融合蛋白的表達。 結果： 1.經(jīng)酶切鑒定，原有保存的質粒證實為pET32a/SIEA26-28kDa-EGFP-scFv； 2.經(jīng)PCR成功擴增IL-18基因片段； 3.經(jīng)限制性內切酶酶切，連接酶連接，轉化至感受態(tài)細胞，鑒定克隆，獲得pET32a/SIEA26-28kDa-IL18-scFv質粒； 4.經(jīng)考馬斯亮藍染色鑒定，在I