三株海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物活性成分的研究.pdf

1、海洋真菌作為海洋微生物中的重要一員，其次級(jí)代謝產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎、種類(lèi)繁多，是新活性先導(dǎo)化合物的重要來(lái)源。為了尋找抗腫瘤活性先導(dǎo)化合物，本論文采用活性追蹤的方法開(kāi)展了1株南極海泥來(lái)源的真菌和2株來(lái)源于不同海域的海藻真菌中次級(jí)代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性次級(jí)代謝產(chǎn)物研究工作。 從6個(gè)海藻樣品中分離得到了21株真菌，采用海蝦生物致死法和MCF7、SF-268、NCI-H460細(xì)胞為模型的篩選模型，以細(xì)胞周期抑制、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)以及壞死性細(xì)胞毒為活

2、性指標(biāo)，結(jié)合化學(xué)篩選，獲得具有活性且次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富的活性菌株9株。 采用正相和反相硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、半制備反相高壓液相色譜等分離方法，從真菌PRl9N-1(Penicillium sp)中分離得到20個(gè)化合物(1-20)，從黃曲霉c-f-3(Aspergillus flavus)中分離得到18個(gè)化合物(21-38)，從真菌v-3-1中分離得到了6個(gè)化合物(39-44)，共計(jì)44個(gè)化合物。

3、 采用現(xiàn)代波譜技術(shù)(UV、IR、NMR、MS、CD)，并結(jié)合其理化性質(zhì)，闡明了40個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)(化合物結(jié)構(gòu)參見(jiàn)Fig.1)；其中新化合物14個(gè)，包括11個(gè)艾里莫芬烷型倍半萜(1-6，8-12)，利用NOESY譜、偶合常數(shù)確定其相對(duì)構(gòu)型，并根據(jù)該類(lèi)化合物的可能生合成途徑，結(jié)合旋光值，推測(cè)了該類(lèi)化合物部分結(jié)構(gòu)的絕對(duì)構(gòu)型；1個(gè)新的二酮哌嗪類(lèi)化合物(21)，利用NOE差譜確定了化合物的相對(duì)構(gòu)型，并通過(guò)氨基酸手性分析柱確定了化合物的絕對(duì)構(gòu)

4、型；2個(gè)2-吡喃酮類(lèi)化合物(24、25)。此外還有2個(gè)化合物(13、28)為首次從天然來(lái)源中分離得到。 另外發(fā)現(xiàn)的其他已知化合物的結(jié)構(gòu)類(lèi)型主要有甾類(lèi)(32、33、40、41)，倍半萜類(lèi)(7，14-16)，苯的簡(jiǎn)單衍生物(17、18、19、26)，生物堿類(lèi)(20、22、23、27、28).2-吡喃酮衍生物(29、30)等。 利用MTT法、SRB法以及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合形態(tài)學(xué)檢測(cè)的方法，對(duì)分離獲得的單體化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行了初

5、步評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：新化合物1對(duì)A549、HL-60細(xì)胞顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性；新化合物8對(duì)A549顯示較強(qiáng)的活性，對(duì)HL-60細(xì)胞顯示中等強(qiáng)度的活性；新化合物10對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞都有微弱的活性；新化合物9對(duì)A549顯示微弱的活性；新化合物11對(duì)HL-60細(xì)胞顯示較弱的活性；新化合物21對(duì)HL-60細(xì)胞顯示微弱的細(xì)胞毒活性；化合物28對(duì)A549、HL-60及MOLT-4三種腫瘤細(xì)胞都顯示出一定的抑制活性。 運(yùn)用cAMP檢測(cè)方法對(duì)新化

6、合物24、25的GPR12受體結(jié)合活性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示化合物24能促進(jìn)GPR12-CHO、GPR12-HEK293細(xì)胞中的cAMP含量增加，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。 綜上所述，本文采用組合篩選的方法獲得9株海洋活性真菌，并對(duì)3株海洋真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的活性部位進(jìn)行了系統(tǒng)研究，共分離鑒定了40個(gè)化合物，其中新化合物14個(gè)。其中具有細(xì)胞增殖抑制活性的新化合物6個(gè)，具有GPR12受體激動(dòng)活性的新化合物1個(gè)。上述研究結(jié)果為尋找藥