Bortezomib對非小細胞肺癌作用機制的相關研究.pdf

1、肺癌是目前全球范圍內最常見的惡性腫瘤,近20多年的追蹤發(fā)現(xiàn),每年的肺癌新病例以大約0.5％的速率在增長,其死亡率位居惡性腫瘤之首,嚴重危害人類的生命及健康。衛(wèi)生部第三次全國死因調查顯示,肺癌為我國首位惡性腫瘤死亡的因為。其中非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)是指除了小細胞癌以外的所有類型的肺癌,占所有肺癌的75％-80％。此類肺癌的治療多采用以手術治療為主的治療方法。由于早期臨床癥狀多數(shù)不甚

2、明顯,70％以上的病人在就診時已經處于臨床晚期,而且多發(fā)生了淋巴結或其他臟器的轉移,往往已經失去了手術的機會。盡管隨著診療水平的不斷提高,非小細胞肺癌的生存有所改善,但總的來說預后仍然很差,中位生存期不到一年。非小細胞肺癌的一線化療有效率約為20％-35％,二線化療的有效率通常小于10％。用于非小細胞肺癌的多種治療方案最多使中位生存期延長2-4個月。隨著免疫學及分子生物學的進展和對腫瘤發(fā)病機制的深入研究,腫瘤治療進入了分子靶向治療時代。

3、新一代分子靶向藥物蛋白酶體抑制劑Bortezomib(硼替佐米,商品名:萬珂)已分別于2003年和2005年由美國FDA批準用于多發(fā)性骨髓瘤和套細胞淋巴瘤的治療,通過抑制泛素蛋白酶體通路中NF-κB的活性發(fā)揮抗腫瘤作用。但是,Bortezomib在肺癌中的作用機制目前國內還鮮見文獻報道。本實驗通過研究Bortezomib對非小細胞肺癌(NSCLC)細胞系的增殖、凋亡、細胞周期及核轉錄因子(NF-κB)活性的影響,探討其在肺癌中的抗腫瘤機

4、制。材料與方法
　　 1材料來源
　　 Bortezomib購自西安楊森生物制藥有限公司。抗小鼠NF-κB、抗兔IκBa、抗山羊Bcl-2、抗兔p-Tublin和抗兔β-Actin的一抗購自美國Santa Cruz公司?？故?、抗山羊和抗兔的辣根過氧化物酶標記的二抗購自北京中杉金橋生物有限公司。GLC82、95D、H520、A549、973、H12996個NSCLC細胞系均由中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所提供。Weste

5、rn blot中提取細胞總蛋白的細胞裂解液由本實驗室提供。提取細胞核漿蛋白的試劑盒NE-PER Nuclear and CytoplasticExtraction Reagents購自美國Pierce公司。
　　 2試驗方法
　　 (1)MTT法檢測Bortezomib對細胞生長的抑制作用
　　 細胞分4組:對照組(以無Bortezomib處理的正常培養(yǎng)細胞),25nmol/L組、50nmol/L組、100nmo

6、l/L組,分別采用25、50、100nmol/LBortezomib作用48小時,MTT法測定細胞的生長抑制情況。
　　 (2)流式細胞儀檢測Bortezomib對細胞周期和凋亡的影響
　　 取95D、973、GLC82細胞,均設為2組:25nmol/L組(采用25nmol/LBortezomib作用48h)和對照組(以無Bortezomib處理的正常培養(yǎng)細胞)。流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡情況。
　　 (3)用

7、Western blot檢測不同濃度的Bortezomib作用不同時間對NSCLC細胞系中NF-κB的基本表達及活性的影響,同時檢測Bortezomib處理前后NSCLC中Bcl-2的表達情況。
　　 3結果
　　 (1)不同濃度Bortezomib對非小細胞肺癌生長的抑制作用
　　 Bortezomib對肺癌細胞的生長抑制作用具有劑量依賴性,隨濃度的增加抑制作用增強。
　　 (2)Bortezomib對

8、細胞周期和凋亡的影響
　　 25nmol/L的Bortezomib作用48小時(h)使NSCLC細胞系的細胞周期阻滯在了G2/M期,且處理后的處于G2/M期的細胞比例高于處理前,P<0.05。
　　 (3)Bortezomib對NF-κB表達的影響
　　 Western blot結果顯示Bortezomib對組成性的NF-κB的表達水平沒有影響,但是能明顯地抑制TNF-a誘導的NF-κB的核轉位,并且這種抑制作用

9、具有劑量依賴性。
　　 (4)Bortezomib對973細胞中Bcl-2表達的影響
　　 作為973的對照細胞中存在抗凋亡基因Bcl-2的表達。將細胞暴露于不同濃度的Bortezomib中處理后,可見Bcl-2的表達水平隨Bortezomib作用濃度的增加而降低。
　　 4結論
　　 Bortezomib能夠抑制非小細胞肺癌細胞系發(fā)生增殖,并使細胞發(fā)生G2/M期的阻滯,誘導細胞發(fā)生凋亡,同時抑制NF-κ