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文檔簡介
1、氧化應激和心理應激是人類正常生命進程中不可避免、與生理病理密切相關的事件,二者與老年性癡呆病理特征β-淀粉樣蛋白(β-amyloidprotein,Aβ)的生成密切相關。然而對于氧化應激、心理應激尤其是二者共同作用時腦內(nèi)Aβ1-42及其代謝途徑中相關分子的變化,目前尚未完全闡明。為了探討這個問題,我們進行了如下研究工作: 首先,確定D-半乳糖致氧化應激損傷的適宜劑量。根據(jù)文獻統(tǒng)計結果,選擇75、120、150和1000mg/kg
2、劑量的D-半乳糖,連續(xù)8周注射,觀察小鼠認知功能及腦內(nèi)氧化酶學指標變化。結果表明,四個劑量D-半乳糖均能導致小鼠認知功能損傷,腦內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)活性下降和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量增加,但對不同指標損傷程度不同,結合小鼠給藥期間的一般狀態(tài)變化,我們選取120mg/kg做為氧化應激模型適宜劑量。 其次,通過D-半乳糖
3、建立氧化應激模型,急性束縛建立心理應激模型,采用行為學、生化檢測、放射性免疫和免疫組化等方法,探討氧化應激、心理應激尤其是二者共同作用對小鼠認知功能和腦內(nèi)Aβ1-42表達的影響。三個應激組小鼠腦內(nèi)SOD和CAT活性降低,MDA增加,心理應激和復合應激組小鼠血清皮質酮含量升高,表明氧化應激和心理應激模型是可行性的。三個應激組小鼠出現(xiàn)不同程度認知功能損傷,其中氧化應激對空間認知損傷明顯,心理應激和復合應激對空間和非空間認知都有損傷。三個應激
4、組中小鼠腦內(nèi)Aβ1-42表達均有增加,而且復合應激組較單一應激組增加更明顯。 最后,探討腦內(nèi)Aβ1-42表達增加可能的代謝機制。采用westernblotting和RT-PCR方法,考察腦內(nèi)Aβ1-42的生成、降解和轉運途徑中主要信號分子的改變。結果表明,三種代謝途徑都參與了不同應激條件下腦內(nèi)Aβ1-42的代謝,其中BACE1表達上調(diào)可能是氧化應激和心理應激誘導腦內(nèi)Aβ1-42生成增加的主要途徑;MMP-2和IDE表達的增加,說
5、明降解過程參與了應激條件下腦內(nèi)Aβ1-42的清除;氧化應激和心理應激組中IDE表達不同,提示在不同應激原作用下,發(fā)揮作用的降解酶及作用程度可能不同;三個應激組中LRP-1表達增加,RAGE表達變化不明顯,說明氧化和心理應激下,腦內(nèi)Aβ1-42會向腦外轉運,而腦外Aβ不會向腦內(nèi)轉運,可能是機體在應激刺激下的保護機制。復合應激能增加單一應激中BACE1的表達,可能與氧化應激和心理應激共同作用有關。復合應激中MMP-2和LRP-1表達較單一應
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