多種軟組織肉瘤來源于脂肪來源干細胞的惡性轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：研究脂肪來源干細胞的惡性轉(zhuǎn)化與軟組織肉瘤發(fā)生的關系。
　　 方法：以Balb/C小鼠腹腔脂肪組織為原料培養(yǎng)出脂肪來源干細胞，取第2代，生長旺盛，達到80％-90％融合的脂肪來源干細胞（ADSCs）分成兩組：實驗組細胞用含有1 ug/ml 3-甲基膽蒽的培養(yǎng)基培養(yǎng)1 周,后用DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，第二組用含0.5％ DMSO的培養(yǎng)基培養(yǎng)作為對照組。用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)及生長速度、姬姆薩染色等方法驗證細胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)

2、化。待細胞惡變后，用連續(xù)稀釋法獲得轉(zhuǎn)化細胞的單克隆并進行培養(yǎng)；應用免疫細胞化學方法檢測轉(zhuǎn)化細胞的表面標記；分析其中期染色體數(shù)目、檢測抑癌基因p53外顯子5-9的突變情況；并將足量的轉(zhuǎn)化細胞或單克隆注入裸鼠皮下以檢測其成瘤能力及形成腫瘤的病理性質(zhì)。
　　 結(jié)果：ADSCs經(jīng)3-甲基膽蒽處理一周，再繼續(xù)用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)4月后，部分細胞將表現(xiàn)出腫瘤細胞的一些特征：細胞體積顯著增大，鏡下可觀察到大量處于分裂中期的細胞；細胞增殖速度明

3、顯加快、倍增周期明顯縮短、細胞呈無限生長及增殖的態(tài)勢；細胞對血清的依賴性顯著下降；細胞極性及細胞間接觸抑制現(xiàn)象消失，出現(xiàn)大量復層生長的細胞群落，姬姆薩染色可見細胞呈集落性生長并染色深，提示細胞可能發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化細胞表達PCNA和VEGF-c，癌的標記物；也表達SMA和vimentin，但不表達pan-CK，說明其間充質(zhì)來源性。轉(zhuǎn)化細胞的染色體均為非整倍體；p53的外顯子5-6存在有意義點突變，突變率為1％。惡性轉(zhuǎn)化細胞及其單克隆有成