MTX對映體誘導(dǎo)白血病細BALL-1、CCRF-CEM耐藥及其耐藥機制的研究.pdf

1、目的：建立耐氨甲蝶呤（MTX）對映體的人白血病BALL-1和CCRF-CEM細胞株，觀察其生物學特性。分析MTX不同對映體耐藥細胞株表皮生長因子受體（EGFR）信號通路相關(guān)基因的表達。
　　方法：濃度遞增結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法建立 MTX不同對映體耐藥細胞株，顯微鏡觀察不同MTX對映體作用BALL-1和CCRF-CEM細胞株后細胞形態(tài)變化及活性差異，MTT法檢測耐藥細胞株和親本細胞株耐藥指數(shù)，細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線，Tran

2、swell實驗檢測D-(-)-MTX耐藥細胞株與L-(+)-MTX耐藥細胞株遷移能力差異，流式細胞儀檢測細胞周期。RT-PCR法檢測各細胞株EGFR、KRas、TGF、PI3K基因mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：1.采用濃度遞增結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法，成功建立MTX不同對映體對BALL-1、CCRF-CEM細胞的耐藥細胞株；MTT檢測結(jié)果表明：L-(+)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM對L-(+)-MTX的耐藥指數(shù)分別為

3、2.89，3.73。D-(-)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM對D-(-)-MTX的耐藥指數(shù)分別為9.65，10.72。2.熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)L-(+)-MTX作用后的BALL-1和CCRF-CEM凋亡數(shù)和非凋亡死亡數(shù)明顯高于D-(-)-MTX，而活細胞數(shù)低于D-(-)-MTX。3. Transwell遷移實驗結(jié)果提示D-(-)-MTX耐藥細胞株遷移能力強于L-(+)-MTX耐藥細胞株。4.細胞生長曲線和流式細胞儀檢測顯示：與親

4、本細胞BALL-1，CCRF-CEM相比L型和D型耐MTX細胞株的增殖速度減慢（P<0.05），S期細胞數(shù)量減少(P<0.05)，G0/G1期細胞增多(P<0.05)。5. BALL-1細胞組(BALL-1，L型，D型耐MTX細胞株)有EGFR mRNA基因表達，目的基因與內(nèi)參基因的光密度比值差異有統(tǒng)計學意義（F=641.41，P=0.000），L型與D型耐MTX細胞株光密度值差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000）；BALL-1細胞組有KR

5、as mRNA基因表達（F=673.086， P=0.000），L型與D型耐MTX細胞株光密度值差異有統(tǒng)計學意義（P=0.004）。CCRF-CEM細胞組（CCRF-CEM，L型，D型耐MTX細胞株）亦有EGFR和K-Ras mRNA基因表達（F=151.323，P=0.000），（F=330.894，P=0.000），其中L型與D型耐MTX細胞株光密度值差異有統(tǒng)計學意義（EGFRmRNA P=0.000， K-RasmRNA P=0.