花粉介導法獲得轉耐鹽基因玉米植株及轉化后代的耐鹽性鑒定.pdf

1、玉米在國民經濟中占有重要地位,隨著人民生活水平的不斷提高對玉米的需求也日益增高。我國鹽漬化土地面積有日趨增加的趨勢。為了培育出耐鹽性增強的玉米新品種,以充分利用我國的鹽堿化土地,本課題圍繞三個方面開展了研究,研究內容及結果如下:
　　(1)采用超聲波輔助花粉介導植物轉基因方法,將甜菜堿醛脫氫酶(BADH)基因導入玉米自交系鄭58,收獲T0代種子246粒,T1代植株經卡那霉素抗性篩選及PCR檢測獲得37株陽性植株,轉化率為15.04

2、％(以收獲的 T0代種子為基數)。T2代陽性植株檢出率達55%~63%,T2代PCR陽性植株Southern雜交分析發(fā)現,BADH基因已經整合到部分玉米植株的染色體基因組上,并能遺傳給后代。研究還證明,超聲波輔助花粉介導法是一種經濟、高效、實用的植物基因轉化方法。
　　(2)用不同濃度的NaCl溶液對T2代轉基因玉米植株與對照進行鹽脅迫處理,結果表明:轉BADH基因玉米植株表現出一定的抗逆性,生長狀況明顯優(yōu)于對照;根據非轉化苗對N

3、aCl的反應以及生長狀況,確定250 mmol/L NaCl溶液為玉米幼苗耐鹽性篩選的最適濃度;在此臨界濃度下,玉米形態(tài)指標和生理生化指標的測定結果表明,與對照相比,轉基因植株的株高提高了10.94%~25.7%,鮮重增加了8.62%~18.2%,干重增加了9%~18.18%,相對電導率降低37.21%~58.14%,葉綠素含量增加了15.89%~90.65%,超氧化物歧化酶活性提高64.92%~148.29%,丙二醛含量減少26.97

4、%~48.05%。以上結果表明,轉入甜菜堿醛脫氫酶基因提高了玉米的耐鹽性。
　　(3)采用Hoagland營養(yǎng)液水培方法,研究了不同濃度的NaCl脅迫條件下,轉TaNHX2基因玉米自交系昌7-2和非轉基因對照的幼苗生長情況、植株形態(tài)和生理指標的差異。結果顯示,隨著鹽脅迫濃度的增加,轉基因和非轉基因玉米植株的株高、根長、鮮重、干重和葉綠素含量逐漸下降,丙二醛含量逐漸上升,但是轉基因玉米的變化幅度較小,在幾乎所有脅迫濃度下,轉基因玉米