丙戊酸鈉對PD細胞模型的保護作用研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一種常見的進展緩慢的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,到目前為止,PD還不能完全治愈,探尋該病更好的治療策略是亟待解決的難題。丙戊酸鈉(valproate, VPA),在臨床上用于治療雙相精神障礙和癲癇,也可用于緩解神經(jīng)退行性疾病的癥狀;現(xiàn)有研究表明,VPA在體內(nèi)外都具有神經(jīng)保護和神經(jīng)營養(yǎng)作用,促進神經(jīng)細胞軸突生長,抑制神經(jīng)細胞凋亡。成束和延伸蛋白(fasciculation and elo

2、ngation proteinzeta1, FEZ1)在神經(jīng)細胞發(fā)育、胞內(nèi)運輸、細胞凋亡和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放中起到重要的作用,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及軸突的生長和成束。腎上腺嗜鉻細胞瘤 PC12,可以合成分泌多巴胺,是多巴胺能神經(jīng)元體外培養(yǎng)的細胞模型,常被用來建立體外PD細胞模型。
　　目的：研究VPA對PC12細胞增殖、遷移及對FEZ1表達的影響;建立PD細胞模型,探討VPA對6-OHDA誘導的PC12細胞損傷的神經(jīng)保護和抗氧化作用。

3、
　　方法：⑴采用0.5、0.75、1.0 mM的VPA分別處理PC12細胞24 h,觀察細胞的形態(tài)學變化和細胞遷移作用的影響,以MTT法檢測VPA對細胞增殖作用的影響,采用real-time PCR與Western blot檢測FEZ1的表達變化。⑵建立PD細胞模型,將細胞分組:正常對照組、6-OHDA組、VPA(0.5、0.75、1.0 mM)+6-OHDA組;觀察各組細胞的動態(tài)變化,以MTT法檢測各組細胞的增殖情況,采用re

4、al-time PCR與Western blot檢測FEZ1及凋亡相關(guān)基因的表達變化,檢測各組細胞的SOD活性和MDA含量。
　　結(jié)果：①MTT及細胞劃痕結(jié)果顯示,VPA能促進PC12細胞增殖與遷移,并呈劑量依賴性;real-time PCR與Western blot結(jié)果顯示,VPA能促進FEZ1 mRNA和蛋白的表達,并呈劑量依賴性。②用6-OHDA處理PC12細胞制備PD細胞模型,PC12細胞增殖受到抑制;而用VPA預處理24

5、h后,再以6-OHDA處理24h,細胞凋亡狀況有所緩解,細胞皺縮數(shù)量降低,突起伸長,相互接觸的細胞數(shù)量增多。real-time PCR與Western blot檢測各處理組FEZ1、Bcl-2和Bax的表達結(jié)果顯示:6-OHDA組與正常對照組相比,FEZ1和Bcl-2表達下降,Bax表達上升;VPA+6-OHDA組與6-OHDA組相比,FEZ1和Bcl-2表達上升,Bax表達下降。SOD活性和MDA含量的檢測結(jié)果顯示:6-OHDA組與正