Omi-HtrA2在大鼠腎小管上皮細胞凋亡中的作用及機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：通過RNA干擾(RNAi)技術抑制大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E)Omi/HtrA2蛋白的表達，觀察NRK-52E在缺氧/復氧損傷后發(fā)生凋亡的改變，探討Omi/HtrA2在NRK-52E凋亡中的作用及機制。 方法：實驗分為5組：正常組(常規(guī)培養(yǎng)組)，模型組(缺氧/復氧組)，HK組(轉染重組質粒Pgenesil-1/HK組)，shRNA1組(轉染Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA1組)，shRNA2組(

2、轉染Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA2組)，每組5瓶(75ml培養(yǎng)瓶)細胞。把NRK-52E接種到6孔板中，細胞融合度達到50％-60％時，進行轉染，轉染8小時后換用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，24小時后在熒光顯微鏡下可以觀察到轉染細胞，用含G418(300μg/ml)培養(yǎng)基進行篩選。獲得抗性穩(wěn)定的單克隆細胞后擴大培養(yǎng)，G418(150μg/ml)維持。除正常組外，各組細胞于無氧液中，缺氧環(huán)境(N295％+O21％+CO25％)

3、下培養(yǎng)1小時，再用完全培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)12小時，制作缺氧/復氧模型。模型制作成功后收集各組細胞比較各組細胞凋亡情況：用DNA Ladder及Tunel檢測各組細胞發(fā)生凋亡的情況；用Western blot檢測各組Omi/HtrA2、caspase3的表達。 結果：在倒置熒光顯微鏡下可以觀察轉染組細胞均可見綠色熒光。分析Western blot結果進行顯示：與模型組相比，shRNA1組和shRNA2組Omi/HtrA2、caspas

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