抗番茄灰霉病生物有機肥菌種的篩選及應用研究.pdf

1、番茄灰霉病是常見的對番茄危害較重的一種病害?；瘜W防治番茄灰霉病易產生抗藥性、農藥殘留及生態(tài)失衡等負作用。生物防治具有高效、零污染、不產生抗藥性和預防和治理結合等優(yōu)勢，其中生物有機肥既可以增產，改善產品品質，又可以調節(jié)和改善土壤微生物的組成，進而在一定程度上減輕農作物病害的危害。篩選有效的番茄灰霉病拮抗菌，進而制備拮抗菌劑和生物有機肥均是利用生物技術防治番茄灰霉病的重要途徑。因此，本試驗通過對相關土壤微生物的分離純化，篩選并鑒定對番茄灰霉

2、病病原菌具有較好抑制作用的拮抗菌，并通過單因素和正交試驗優(yōu)化其固體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，研究拮抗菌菌劑的保存方式，還將拮抗菌與腐熟后的有機肥發(fā)酵制成生物有機肥，進而通過室內盆栽試驗來研究其對番茄灰霉病的防治效果。
　　1.土壤中番茄灰霉病拮抗菌的分離、篩選及鑒定。為了獲得對番茄灰霉病有抑制效果的拮抗菌并確定菌株的分類地位，以土壤為分離源，采用稀釋涂平板及平板劃線方法分離，平板對峙方法篩選，對所篩的菌株進行菌株形態(tài)鑒定和ITS區(qū)序列

3、解析鑒定。結果表明，從土樣中共分離出47株真菌，初篩得到27株真菌對番茄灰霉病原菌有拮抗作用，復篩得到一株對番茄灰霉病病原菌抑制率高達74.80％的菌株Z47，鑒定為草酸青霉（Penicillium oxalicum）。
　　2.拮抗菌Z47固體發(fā)酵條件的優(yōu)化及其菌劑保存方式的研究。為研究拮抗菌Z47固體發(fā)酵條件和菌劑保存方式，通過單因素和正交試驗探索了其固體培養(yǎng)基、外加碳源、外加氮源、外加磷源、料水比、固料瓶裝量、接種量、光照、

4、發(fā)酵溫度及時間對該菌產孢量的影響;并以濕樣和烘干樣在低溫和室溫條件下保存拮抗菌Z47菌劑，定期測定孢子數和有效活菌數。拮抗菌Z47的固體發(fā)酵優(yōu)化條件為:固料瓶裝量15 g/250mL三角瓶，稻殼粉與麩皮4∶1混合，外加麥芽糖、硫酸銨和磷酸氫二鉀的量分別為1.5％、2％和0.15％，料水比為1∶0.6(g·mL-1)，接種量為12.5％(mL·g-1)，全黑暗培養(yǎng)，25℃～20℃～28℃下依次發(fā)酵2d，持續(xù)發(fā)酵12d，可獲得高達5×109

5、 CFU/g的產孢量。濕樣5℃存放的拮抗菌Z47孢子存活率一直最高，但從拮抗菌Z47有效活菌數上看，40℃烘干樣室溫存放顯著高于濕樣5℃存放、濕樣室溫存放和40℃烘干樣5℃存放，因此，拮抗菌Z47菌劑最佳的保存方式為40℃烘干后室溫存放。
　　3.拮抗菌Z47生物有機肥的制備及其盆栽應用研究。為了制備拮抗菌Z47生物有機肥并研究其對番茄灰霉病的生防效果和對土壤微生物的影響，將拮抗菌接種于腐熟蛋雞糞有機肥中，二次發(fā)酵后應用于番茄盆栽

6、試驗，定期檢測番茄灰霉病的發(fā)生情況和番茄根際土壤中微生物的變化，并在盆栽結束時，測定番茄的生物量。結果表明，拮抗菌Z47生物有機肥中有效活菌數達2×108 CFU/g以上，施用拮抗菌Z47生物有機肥（處理5）對番茄灰霉病的防效達到73.67％，顯著高于拮抗菌Z47菌液處理（處理3）和普通有機肥處理（處理4）;處理5的番茄株高、莖粗、鮮重和干重也顯著高于其它處理，表現出顯著的促生效果;相對于其他處理，處理5使番茄根際土壤中細菌和真菌數量顯