大豆磷脂對(duì)大黃魚(yú)(Larmichthys crocea)稚魚(yú)和幼魚(yú)生長(zhǎng)和磷脂代謝的影響.pdf

1、以大黃魚(yú)(Larmichthys crocea)為研究對(duì)象,通過(guò)攝食生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),比較研究大豆磷脂對(duì)大黃魚(yú)稚魚(yú)和幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響,并在此基礎(chǔ)上探討大黃魚(yú)磷脂代謝的機(jī)理。本文研究?jī)?nèi)容和主要研究結(jié)果如下:
　　1.飼料磷脂對(duì)大黃魚(yú)稚魚(yú)和幼魚(yú)生長(zhǎng)和體組成的影響
　　分別以初始體重為(3.86±0.24)mg和(7.36±0.33)g的大黃魚(yú)仔稚魚(yú)和幼魚(yú)為對(duì)象,進(jìn)行30d和60d的攝食生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),研究飼料磷脂對(duì)大黃魚(yú)的生長(zhǎng)和體成分的影響,進(jìn)

2、而確定大黃魚(yú)幼魚(yú)飼料磷脂的最適需求量。仔稚魚(yú)飼料中添加0％、5%和12%的大豆磷脂配制等氮等脂的人工微顆粒飼料,分別投喂15日齡大黃魚(yú)仔稚魚(yú),并以投喂生物餌料組為對(duì)照。幼魚(yú)飼料中添加0%、2%、4%、6%和8%的大豆磷脂配制等氮等脂的實(shí)驗(yàn)飼料。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著飼料磷脂含量的升高,大黃魚(yú)仔稚魚(yú)的存活率、特定生長(zhǎng)率和終末體長(zhǎng)呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。飼料不添加磷脂組的存活率、特定生長(zhǎng)率和終末體長(zhǎng)顯著低于對(duì)照組和磷脂添加組(P<0.05),飼料磷脂添

3、加組與對(duì)照組之間差異不顯著(P>0.05)。然而,飼料中添加磷脂并未顯著影響幼魚(yú)的存活率和特定生長(zhǎng)率(P>0.05)。隨飼料磷脂含量的升高,稚魚(yú)魚(yú)體粗脂肪呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。飼料不添加磷脂組的魚(yú)體粗脂肪顯著低于對(duì)照組和磷脂添加組(P<0.05),飼料磷脂添加組與對(duì)照組之間差異不顯著(P>0.05)。隨著飼料磷脂含量的升高,幼魚(yú)魚(yú)體粗脂肪含量呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢(shì),當(dāng)飼料磷脂含量為5.86%時(shí)最低,顯著低于其它處理組(P<0.05)。隨著飼料

4、磷脂含量的升高,幼魚(yú)肝臟脂肪含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。當(dāng)飼料磷脂含量為3.05%時(shí)最高,顯著高于其它處理組(P<0.05);飼料不添加磷脂組顯著高于7.4%和9.63%添加量組(P<0.05)。綜上結(jié)果,飼料磷脂對(duì)生長(zhǎng)的促進(jìn)作用主要在稚魚(yú)階段;幼魚(yú)階段飼料磷脂不會(huì)顯著影響大黃魚(yú)的生長(zhǎng),但是適宜的磷脂添加量可能有利于脂肪的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　2.大黃魚(yú)磷脂代謝關(guān)鍵基因的克隆及其表達(dá)量隨稚魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育的變化
　　利用同源克隆技術(shù)和R

5、ACE技術(shù)從大黃魚(yú)肝臟中成功擴(kuò)增出5’胞苷三磷酸磷脂酰膽堿胞苷轉(zhuǎn)移酶(CCT)和胞質(zhì)型磷脂酶A2(cPLA2)的全長(zhǎng)。序列分析發(fā)現(xiàn),CCT全長(zhǎng)2419bp(Genebank登錄號(hào):KF006239.1),包括273bp的5’端非編碼區(qū),1107bp的開(kāi)放閱讀框,1010bp的3’端非編碼區(qū),共編碼369個(gè)氨基酸。cPLA2全長(zhǎng)共計(jì)2550bp(Genebank登錄號(hào):KF006240.1),其中5’端非編碼區(qū)176bp,開(kāi)放閱讀框216

6、9bp,3’端非編碼區(qū)205bp,共編碼723個(gè)氨基酸。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明,大黃魚(yú)的CCT和cPLA2基因與其他魚(yú)類(lèi)的親緣關(guān)系較近,與其他物種的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。應(yīng)用Real-time PCR對(duì)不同日齡的大黃魚(yú)稚魚(yú)CCT和cPLA2mRNA的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。定量結(jié)果表明,孵化后,大黃魚(yú)稚魚(yú)CCT和cPLA2的表達(dá)量隨日齡的變化先顯著升高后顯著下降并趨于平穩(wěn),且都在15日齡時(shí)達(dá)到最大值。CCT和cPLA2表達(dá)量的變化與大黃魚(yú)稚魚(yú)消化系統(tǒng)的發(fā)育

7、同步。
　　3.飼料磷脂對(duì)大黃魚(yú)稚魚(yú)和幼魚(yú)磷脂酰膽堿合成代謝的影響
　　研究結(jié)果表明,在稚魚(yú)階段,飼料磷脂沒(méi)有顯著影響稚魚(yú)魚(yú)體磷脂酰膽堿胞苷?；D(zhuǎn)移酶(CCT)、1,2-二脂酰甘油:膽堿磷酸?；D(zhuǎn)移酶(CPT)、二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)、磷脂酰乙醇胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(PEMT)和胞質(zhì)型磷脂酶A2(cPLA2)mRNA的表達(dá)(P>0.05)。隨著飼料磷脂含量的升高,分泌型磷脂酶A2(sPLA2)mRNA的表達(dá)量呈現(xiàn)下降

8、趨勢(shì)。當(dāng)飼料中不添加磷脂時(shí),分泌型磷脂酶A2(sPLA2)mRNA的表達(dá)量最高,顯著高于對(duì)照組和磷脂添加組(P<0.05)。對(duì)照組LPCAT mRNA的表達(dá)量最高,顯著高于飼料處理組(P<0.05),各飼料處理組織間差異不顯著(P>0.05)。隨著磷脂含量的升高,微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白(MTP)mRNA的表達(dá)量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。當(dāng)飼料中不添加磷脂時(shí)最高,顯著高于對(duì)照組和磷脂添加組(P<0.05)。而各組之間載脂蛋白B100(apoB100