中原牡丹花黃酮的檢測(cè)、純化及抗氧化活性研究.pdf

1、牡丹為我國(guó)著名花卉，被稱為“萬(wàn)花一品”、“冠絕群芳”的“花王”。黃酮類化合物是一類存在于自然界的、具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的化合物，具有廣泛的生物活性，其中最重要的是抗氧化活性。本文主要研究了中原牡丹花黃酮的比色測(cè)定方法，確定了大孔吸附樹(shù)脂法精制牡丹花黃酮的工藝條件，同時(shí)采用多種反應(yīng)體系研究了中原牡丹花黃酮的抗氧化活性并對(duì)中原牡丹花中黃酮類化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。具體研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　?。?）借助于紫外掃描，通過(guò)對(duì)氯化鋁顯色

2、法、硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法和直接測(cè)定法3種比色方法與高效液相色譜法測(cè)定結(jié)果的對(duì)比和方法評(píng)價(jià)的研究，確定了直接測(cè)定法（測(cè)定波長(zhǎng)為350nm）是一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果較準(zhǔn)確的方法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，可用于中原牡丹花黃酮含量的快速測(cè)定。
　?。?）比較了21種大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附特性，篩選出了適合吸附中原牡丹花黃酮的樹(shù)脂，研究了牡丹花黃酮在大孔吸附樹(shù)脂上的動(dòng)態(tài)吸附特性和解吸條件，并確定了牡丹花黃酮的適宜工藝條件。結(jié)果表明：藍(lán)深LS-303大

3、孔吸附樹(shù)脂對(duì)牡丹花黃酮有較好的吸附分離性能，吸附溶液的pH值為6.0，上樣濃度為6.92mg/mL，上樣流速為0.72mL/min，高徑比為10∶1，洗脫劑為90％的乙醇溶液，洗脫流速為0.72mL/min。牡丹花提取物中的黃酮經(jīng)藍(lán)深LS-303樹(shù)脂床吸附分離后，黃酮含量由12.17%提高到77.01%，回收率為96.6%。
　?。?）研究了中原牡丹花“大棕紫”花色素粗提物和經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化的牡丹花黃酮在不同試驗(yàn)體系中的抗氧化活

4、性。試驗(yàn)結(jié)果表明，相同濃度條件下，牡丹花黃酮的還原力略低于抗壞血酸而顯著高于蘆丁，但粗提物的還原力比抗壞血酸和蘆丁都要低；牡丹花黃酮對(duì)DPPH·和HO·具有較強(qiáng)的清除能力，且在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的量效關(guān)系，牡丹花黃酮、粗提物、Vc和蘆丁對(duì) DPPH·的半清除濃度（EC50）分別為80.72μg/mL、287.74μg/mL、81.52μg/mL和141.45μg/mL，其中牡丹花黃酮與HO·反應(yīng)的速率常數(shù)為8.521×107L·g-1

5、·s-1。在脂質(zhì)體氧化體系中，牡丹花黃酮可通過(guò)清除水溶性過(guò)氧自由基及脂過(guò)氧化自由基作用抑制小鼠肝勻漿和AAPH誘導(dǎo)的卵磷脂脂質(zhì)體氧化。
　?。?）采用高效液相色譜與二極管陣列檢測(cè)器和電噴霧電離質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-DAD-ESI-MS）分析了“洛陽(yáng)紅”花瓣中黃酮化合物，初步確定了中原牡丹花中8個(gè)黃酮化合物的基本結(jié)構(gòu)，分別為：槲皮素-二糖苷（六碳糖+六碳糖）、山奈酚二糖苷（六碳糖+六碳糖）、異鼠李素二糖苷（六碳糖+六碳糖）、木犀草