豬沙門氏菌的臨床分離鑒定及耐藥性消除研究.pdf

1、沙門氏菌（Salmonella）為腸桿菌科沙門氏菌屬成員，是一類條件性細胞內寄生的革蘭氏陰性腸桿菌，絕大多數(shù)對人和動物有致病性，主要引起發(fā)熱、胃腸炎、腹瀉和敗血癥等，是世界上引起食物中毒最多的病原菌。由于疾病治療及抗菌素類飼料添加劑的不斷使用，各個國家的沙門氏菌耐藥性傳播迅速，成為全球關注的公共衛(wèi)生問題。中國是養(yǎng)豬大國，因此豬沙門氏菌病應受到特別的關注。 本研究針對沙門氏菌病臨床發(fā)病豬及多重耐藥性沙門氏菌開展了以下工作：

2、 1．從903個臨床發(fā)病豬群中分離得到41株沙門氏菌。血清分型結果顯示，主要分布于6個血清型，但以豬霍亂和鼠傷寒兩種血清型為主，分別為21株和8株。 2．采用K-B法對分離菌進行了19種臨床常用抗生素的耐藥性分析，結果顯示，分離株的多重耐藥性相當嚴重，94.3％的菌株耐10種以上抗生素；除鼠傷寒沙門氏菌外，大部分血清型對丁胺卡那、氟喹諾酮類、先鋒V及先鋒Ⅵ、痢特靈、多粘菌素B敏感；而鼠傷寒沙門氏菌僅對丁胺卡那與先鋒V、Ⅵ敏感。

3、 3．篩選出對14種抗生素具有耐藥性的鼠傷寒沙門氏菌17y，用高溫高濃度SDS處理17y，獲得了對11種抗生素敏感的17S1。 4．對17y和17S1耐藥基因進行PCR檢測，結果表明大部分耐藥基因均存在于質粒上，隨著質粒消除而被消除，包括：氨芐青霉素耐藥基因（blaTEM和blaOXA-1）、氯霉素耐藥基因（catl）、四環(huán)素耐藥基因（tet（B））、慶大霉素耐藥基因（aacC2）、氨基糖苷類耐藥基因（aadA8b）、甲氧

4、芐胺嘧啶耐藥基因（dhfrXⅡ）、磺胺類耐藥基因（sull）等。從耐藥菌中檢測到Ⅰ型整合子，也存在于質粒上。質粒圖譜也證實處理后細菌部分質粒帶消失。 5．克隆測序了喹諾酮耐藥基因gyrA與parC，證明該類基因位于染色體上。測序分析證實，gyrA第87位氨基酸由耐藥菌17y的天冬酰胺（Asn）突變?yōu)槊舾芯?7S1的天冬氨酸（Asp），表明這種突變導致了沙門氏菌對喹諾酮類藥物的耐藥性逆轉。 6．敏感菌中未擴增到質粒毒力基因

5、spv與rck，說明毒力相關質粒被消除。 7．動物實驗顯示，17Sl對小鼠的毒力降低（LD<,50>增加10倍）、在小鼠體內的增長與擴散速度顯著降低（P＜0.05）。 8．繪制了17y和17Sl的生長曲線，結果17S1比17y提前進入對數(shù)生長期，且持續(xù)時間長。 總之，本研究闡明了沙門氏菌及其多重耐藥的流行情況，揭示了豬源沙門氏菌嚴重的多重耐藥性，其多重耐藥性對人類健康的潛在危害應引起重視；對鼠傷寒沙門氏菌的多重耐