基于適配體特異性作用的乳腺癌細胞表面多種腫瘤標記物同時檢測的新方法研究.pdf

1、癌癥是全世界首要的死亡因素，全世界每年有幾百萬人死于癌癥疾病。腫瘤疾病的早期診斷是癌癥病人存活的關(guān)鍵因素。腫瘤細胞表面腫瘤標記物的表達種類、表達水平及其構(gòu)型的變化，是惡性腫瘤早期診斷、分類、預后判斷以及治療的重要指標。尤其是腫瘤蛋白的異常表達與細胞的惡化和突變緊密關(guān)聯(lián)。對腫瘤細胞表面多種腫瘤標記物進行同時檢測，不僅能夠大幅提高檢測的正確率，更有助于闡明腫瘤標記物在細胞癌變過程中的作用。本論文旨在建立一種針對乳腺癌細胞表面多種腫瘤蛋白的熒

2、光檢測方法，為乳腺癌疾病的臨床診斷提供高靈敏、高準確性的細胞水平的檢測方法。該方法不僅實現(xiàn)了乳腺癌細胞表面多腫瘤蛋白的同時檢測，還能對不同類型的乳腺癌細胞加以區(qū)分，在與腫瘤蛋白相關(guān)的癌癥早期診斷中有潛在的應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下:
　　設(shè)計了一種可激活的適配體探針分子，利用其與目標蛋白結(jié)合前后熒光信號的改變實現(xiàn)了癌細胞表面多種腫瘤蛋白的同時檢測。該探針分子由識別序列和修飾序列兩部分組成，其識別部分為能與目標蛋白特異性結(jié)合的適配體序列

3、，我們在其兩端分別修飾了完全互補的堿基序列（即修飾序列），使探針分子表現(xiàn)為莖環(huán)狀，并在其5'端標記熒光發(fā)光基團，3'端標記淬滅基團。當探針分子與細胞作用前，由于熒光發(fā)光基團和淬滅基團靠得很近，發(fā)生了熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)而熒光淬滅。因此，探針分子本身幾乎檢測不到熒光信號。而當探針分子與細胞作用后，其莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)被打開，造成熒光基團遠離淬滅基團，熒光信號恢復。我們通過設(shè)計不同的可激活適配體探針并對其分別標記熒光基團和淬滅基團，實現(xiàn)了細

4、胞內(nèi)多種腫瘤相關(guān)蛋白的同時檢測。根據(jù)可激活適配體探針熒光信號的恢復達到乳腺癌MCF-7細胞的高靈敏檢測，其靈敏度可以低達每毫升10個細胞。該方法的優(yōu)勢在于所設(shè)計的可激活的適配體探針有效避免了背景信號的干擾，大幅度地提高了檢測的靈敏度?？杉せ畹倪m配體探針不與血液中非目標物質(zhì)發(fā)生作用進一步揭示了該探針與目標細胞的特異性結(jié)合。另外，用三種不同的可激活的適配體探針與不同的乳腺癌細胞作用，通過檢測三種腫瘤相關(guān)蛋白在各個細胞表面的表達水平，對不同型