大鼠肺勻漿上清液體外誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:探討大鼠肺勻漿上清液誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向肺泡上皮細胞分化的可行性。
　　方法:利用全骨髓貼壁分離法分離、純化大鼠的間充質(zhì)干細胞，觀察細胞的形態(tài)，繪制生長曲線，并采用流式細胞術(shù)檢測細胞表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34、CD49d的表達情況。經(jīng)骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞誘導液誘導后，分別采用茜素紅染色法、油紅O染色法、甲苯胺藍染色法檢測骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導分化情況。正常肺組織和博來霉素誘導的損傷肺組織，分別提取

2、勻漿上清液，誘導第3代骨髓間充質(zhì)干細胞。實驗組分為三組:骨髓間充質(zhì)干細胞組，骨髓間充質(zhì)干細胞+正常大鼠肺勻漿上清液組，骨髓間充質(zhì)干細胞+博來霉素損傷大鼠肺勻漿上清液組，持續(xù)誘導10天，通過細胞免疫熒光法和RT-PCR法分別在蛋白水平和基因水平檢測SP-C的表達。
　　結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)到第3代時形成漩渦狀、紡錘形、形態(tài)相對均一的貼壁細胞。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示其表面抗原CD29、CD90呈陽性，CD49d、CD34、CD4

3、5呈陰性。骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞誘導液誘導后，茜素紅染色呈紅色，油紅O染色呈橘紅色，甲苯胺藍呈藍色。經(jīng)肺勻漿上清液誘導后的骨髓間充質(zhì)干細胞，細胞免疫熒光和RT-PCR顯示各干預組均有SP-C蛋白的表達，對照組無SP-C蛋白的表達。統(tǒng)計學分析結(jié)果:正常及博來霉素損傷大鼠肺勻漿上清液誘導細胞免疫熒光SP-C蛋白的表達陽性率分別為13.29％及25.27％; RT-PCR檢測顯示博來霉素損傷的肺勻漿上清液陽性率較正常肺勻