大鼠肺勻漿上清液體外誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討大鼠肺勻漿上清液誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向肺泡上皮細胞分化的可行性。
  方法:利用全骨髓貼壁分離法分離、純化大鼠的間充質(zhì)干細胞,觀察細胞的形態(tài),繪制生長曲線,并采用流式細胞術(shù)檢測細胞表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34、CD49d的表達情況。經(jīng)骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞誘導液誘導后,分別采用茜素紅染色法、油紅O染色法、甲苯胺藍染色法檢測骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導分化情況。正常肺組織和博來霉素誘導的損傷肺組織,分別提取

2、勻漿上清液,誘導第3代骨髓間充質(zhì)干細胞。實驗組分為三組:骨髓間充質(zhì)干細胞組,骨髓間充質(zhì)干細胞+正常大鼠肺勻漿上清液組,骨髓間充質(zhì)干細胞+博來霉素損傷大鼠肺勻漿上清液組,持續(xù)誘導10天,通過細胞免疫熒光法和RT-PCR法分別在蛋白水平和基因水平檢測SP-C的表達。
  結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)到第3代時形成漩渦狀、紡錘形、形態(tài)相對均一的貼壁細胞。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示其表面抗原CD29、CD90呈陽性,CD49d、CD34、CD4

3、5呈陰性。骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞誘導液誘導后,茜素紅染色呈紅色,油紅O染色呈橘紅色,甲苯胺藍呈藍色。經(jīng)肺勻漿上清液誘導后的骨髓間充質(zhì)干細胞,細胞免疫熒光和RT-PCR顯示各干預組均有SP-C蛋白的表達,對照組無SP-C蛋白的表達。統(tǒng)計學分析結(jié)果:正常及博來霉素損傷大鼠肺勻漿上清液誘導細胞免疫熒光SP-C蛋白的表達陽性率分別為13.29%及25.27%; RT-PCR檢測顯示博來霉素損傷的肺勻漿上清液陽性率較正常肺勻

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