shRNA LKB1慢病毒載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染和表達(dá)的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：
　　構(gòu)建針對(duì)人LKB1(liver kinase B1，或STK11 serine/threonine protein kinase11)基因的特異性短發(fā)卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）表達(dá)的慢病毒載體，并觀察轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞Huh7后對(duì)LKB1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　方法：
　　根據(jù)人LKB1的基因信息，設(shè)計(jì)3條針對(duì)LKB1基因cds區(qū)的siRNA序列，同時(shí)設(shè)計(jì)1條negativ

2、e序列用于RNAi陰性對(duì)照（Negative Control,NC），組建與shRNA相對(duì)應(yīng)的4對(duì)互補(bǔ)的單鏈DNA。將合成的序列插入空載體GV115（元件順序?yàn)椋篽U6-MCS-CMV-EGFP）中，重組獲得慢病毒載體。進(jìn)行測(cè)序鑒定后，再轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞產(chǎn)生病毒液，得到的病毒液再轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株Huh7。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞LKB1 mRNA的表達(dá)情況，Western印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞LKB1

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