共刺激分子OX40-OX40L與活化T細(xì)胞核因子cl在動脈粥樣硬化中的表達(dá)及作用.pdf

1、目的：本研究擬觀察在載脂蛋白E基因敲除(ApoE—/—)小鼠動脈粥樣硬化模型中，小鼠血脂、OX40、OX40配體(OX40L)及活化T細(xì)胞核因子Cl(NFATcl)表達(dá)水平的變化，探討OX40—OX40L相互作用對其淋巴細(xì)胞中活化T細(xì)胞核因子Cl表達(dá)的影響及相關(guān)作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 (1)采用ApoE—/—基因敲除鼠頸動脈硅膠圈植入法快速制作動脈粥樣斑塊模型，蘇木精—伊紅(HE)染色，用于病理形態(tài)學(xué)分析。免疫組

2、化檢測頸動脈粥樣斑塊中NFATcl表達(dá)，小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl、OX40、OX40L mRNA和蛋白表達(dá)分別應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR和流式細(xì)胞技術(shù)檢測。
　　 (2)取模型鼠淋巴細(xì)胞，以不同濃度刺激型OX40抗體上調(diào)OX40—OX40L相互作用，另以不同濃度抑制型OX40L抗體下調(diào)OX40—OX40L相互作用，不同時間點(diǎn)收獲細(xì)胞，以實(shí)時熒光定量PCR、流式細(xì)胞技術(shù)和Western Blot檢測NFATcl表達(dá)水平。
　　

3、 結(jié)果：
　　 (1)與正常對照組比較，手術(shù)組血清TC、TG、LDL—C明顯升高，HDL—C則明顯降低。
　　 (2)正常對照組頸動脈內(nèi)膜光滑平整，管壁呈半透明狀；無脂紋和斑塊形成，彈力板完整。手術(shù)組ApoE—/—動脈粥樣斑塊模型小鼠有明顯斑塊形成，含大量泡沫細(xì)胞，富含脂質(zhì)，可見膽固醇結(jié)晶，彈力板變性、斷裂。
　　 (3)手術(shù)組ApoE—/—小鼠頸動脈AS斑塊中NFATcl顯著表達(dá)，正常對照組NFATcl頸動脈中

4、不表達(dá)。
　　 (4)手術(shù)組ApoE—/—AS斑塊模型小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中NFATcl、OX40、OX40LmRNA和蛋白表達(dá)均明顯高于正常對照組，ApoE—/—小鼠NFATcl與OX40、OX40L表達(dá)成正相關(guān)。
　　 (5)anti—OX40特異性刺激OX40—OX40L軸后，小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，anti—OX40(20μg/ml)時刺激作用最強(qiáng)，刺激時間24h最佳。
　　 (

5、6)anti—OX40L特異性阻斷OX40—OX40L軸能明顯抑制NFATcl mRNA及蛋白表達(dá)，anti—OX40L(20μg/ml)時抑制作用最強(qiáng)，抑制時間24h最佳。
　　 結(jié)論：
　　 (1)NFATcl與OX40—OX40L在動脈粥樣硬化的形成、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　 (2)OX40—OX40L相互作用能調(diào)控ApoE—/—小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl表達(dá)，NFATcl是受OX40—OX40L調(diào)控的影