逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)風(fēng)疹病毒RNA方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、目的：建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快速、低成本檢測(cè)風(fēng)疹病毒RNA的方法。
　　 方法：選取保守基因E1設(shè)計(jì)引物，采用逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(ReverseTranscription-Loop-Mediate Isothermal Amplification，RT-IAMP)技術(shù)建立了檢測(cè)風(fēng)疹病毒RNA的方法，優(yōu)化RT-LAMP反應(yīng)體系，并進(jìn)行特異性、敏感性評(píng)估，在此基礎(chǔ)上建立依據(jù)SYBR Green I顯色反應(yīng)直接判斷結(jié)果的簡(jiǎn)

2、便方法。為驗(yàn)證我們建立方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，最后用建立的方法對(duì)103例孕婦血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并與RT-PCR及ELISA相比較。
　　 結(jié)果：通過(guò)對(duì)建立的RT-LAMP擴(kuò)增風(fēng)疹病毒RNA反應(yīng)體系的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)鎂離子對(duì)RT-LAMP影響較大，其它如甜菜堿、溫度等影響不是很大。特異性評(píng)估表明僅風(fēng)疹病毒檢測(cè)陽(yáng)性，而雙蒸水、人類基因組RNA、丙型肝炎病毒RNA檢測(cè)均為陰性，酶切鑒定結(jié)果進(jìn)一步證明了擴(kuò)增的特異性。檢測(cè)下限約為每反應(yīng)管10拷貝。