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文檔簡介
1、目的:通過改良方法建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型,對實驗大鼠基底動脈內(nèi)皮細胞進行形態(tài)學(xué)檢測及病理檢查,探討PI3K-AKT通路在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈內(nèi)皮細胞凋亡中的意義。
方法:采用改良枕大池二次注血法建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,給藥方法為腦室內(nèi)給藥。84只清潔級SD大鼠隨機分為A組(對照組)、B組(SAH組)、C組(SAH+PI3K-AKT通路激動劑IGF-1組),每組按SAH后1d、3d、7d、11d時間點分成4個
2、亞組(n=7),相應(yīng)時間點甲醛灌注取腦后透射電子顯微鏡觀察并原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測三組大鼠基底動脈內(nèi)皮細胞凋亡;Western blot方法測定不同時間點基底動脈P-AKT、caspase-3表達水平。
結(jié)果1.透射電子顯微鏡觀察:與對照組(A組)比較,SAH后第3、7天B組、C組內(nèi)皮細胞出現(xiàn)凋亡樣變化,血管內(nèi)皮細胞膜起泡,胞質(zhì)凝聚,胞漿空泡變,核染色質(zhì)凝聚、趨邊,以B組更顯著。到SAH后第11天B、C組上述情
3、況減輕,以C組更顯著。2.TUNEL檢測:B、C兩組組在SAH后3、7天均出現(xiàn)細胞凋亡,以B組更顯著;而到SAH后11天B、C組凋亡程度有所緩解,以C組更顯著。3.Westernblot檢測P-AKT和caspase-3的蛋白表達,與內(nèi)參β-actin比較測灰度值。結(jié)果顯示:(1) SAH后第3、7天C組P-AKT的表達顯著高于A組,而B組P-AKT的表達與A組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,B、C兩組caspase-3的表達均高于A組,以B組更
4、顯著;(2)而到SAH后11天C組caspase-3的表達與3、7天比較明顯降低;而B組P-AKT表達增加,與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,caspase-3的表達則有所下降。
結(jié)論1.蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈內(nèi)皮細胞出現(xiàn)凋亡樣變化;2.基因AKT與caspase-3在SAH后基底動脈中均有表達,在不同時間點表達量有差異,并呈負相關(guān)關(guān)系。3.PI3K-AKT通路可能參與了SAH后基底動脈內(nèi)皮細胞凋亡的過程,P-AKT表達增加可
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