補救性ICSI臨床結局及受精失敗卵子紡錘體和染色體分析.pdf

1、傳統(tǒng)體外受精（IVF）受精率維持在60-70％，然而，在精液常規(guī)正常的情況下，受精失敗的發(fā)生率為5％-15％，受精低下（定義為25％）的發(fā)生率為20％，這類夫婦，再次發(fā)生IVF受精失敗或者受精低下的發(fā)生率為30-50％。卵胞漿內單精子注射（ICSI）能成功避免大部分IVF周期中的受精失敗的發(fā)生，因此當傳統(tǒng)IVF失敗時，可以考慮對這些IVF失敗的卵母細胞再次顯微注射。但是對受精失敗的1天齡的卵母細胞行補救性ICSI后，結局并不好。我們進行

2、了臨床數據的回顧性分析來證明非男性因素不孕行傳統(tǒng)體外受精失敗后，對受精失敗卵母細胞行補救性ICSI價值不大，這可能由于卵母細胞缺陷導致受精失敗。已經有人提出卵母細胞缺陷導致傳統(tǒng)體外受精失敗，但是卵母細胞異常相關的檢測卻很難做到，尤其是無法建立相關的動物模型來解釋這種異常。紡錘體和染色體是反映卵母細胞質量的微觀結構，卵母細胞質量對卵胞漿內單精子注射的影響，是遲救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精，或者受精后優(yōu)胚率，妊娠率低的重要原因

3、。所以，我們用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察卵母細胞內部紡錘體，染色體結構，而且我們第一次設立了對照組來進一步證實卵母細胞缺陷影響非男性因素不孕患者的IVF結局。
　　 第一章
　　 目的: 探討卵細胞內單精子注射（ICSI）對非男性因素不孕行體外受精（IVF）失敗患者治療結局的影響。
　　 方法: 回顧性分析2006年1月—2008年l2月由于第一周期常規(guī)體外受精(IVF)治療中卵子完全不受精或受精率≤25％

4、，行補救性ICSI的10個周期（補救性ICSI），以及因前次受精失敗而在隨后的治療周期中采取ICSI方法受精的19個周期（后續(xù)性ICSI）的ICSI治療結局。對照組為2007年因男方少弱精子進行第1次ICSI治療的133個周期。
　　 結果: 補救性ICSI組受精率，優(yōu)胚率，植入率，妊娠率，分娩率均低于對照組，而且受精率與分娩率差異有顯著性（P<0.05），優(yōu)胚率，植入率，妊娠率差異有極顯著性（P<0.01）；后續(xù)性ICSI組植

5、入率，妊娠率，分娩率分別為8.8％，21.1％，15.8％，均低于對照組的21.2％，45.1％，39.1％，且有顯著性差異（P<0.05），受精率兩者分別為49.5％，63.5％，有極顯著性差異（P<0.01）。優(yōu)胚率后續(xù)性ICSI組低于對照組，但是差異無顯著性。
　　 結論: (1)對于非男性因素不孕IVF失敗患者，ICSI能避免受精失敗，但是受精率以及妊娠結局受到卵母細胞的隱匿性異常的影響。(2)考慮ICSI的安全性，

6、補救性ICSI適合作為IVF后受精失敗的診斷手段而不是治療目的。(3)補救性ICSI組（16-18小時）由于無妊娠結局，建議不推廣此方法。
　　 第二章
　　 目的：研究非男性因素不孕行IVF后受精失敗的第2天卵母細胞微管、紡錘體的形態(tài)，染色體的排列，卵子激活障礙的情況。探討紡錘體形態(tài)異常，染色體沒有準確的結合到紡錘體上，微管排列異常不能形成紡錘體，是否參與了IVF受精失敗的原因。
　　 方法：來自生殖中心非男

7、性因素不孕行IVF后受精率低于25％，Day2仍未見分裂的MII卵母細胞（胞漿內未見原核，卵周隙內僅見第一極體，48h沒有卵裂時確定為未受精卵母細胞）作為實驗組（IVF FF組），因男性因素行ICSI治療后Day2仍未形成原核的MII期卵母細胞作為對照組（ICSI NF組），同時，因男性因素行ICSI過程中未熟的卵母細胞進行體外培養(yǎng)后成熟卵母細胞作為對照組（IVM組）。采用免疫熒光法分別對IVF受精失敗的MII期卵（IVF FF組），I

8、CSI未受精卵（ICSI NF組）及體外成熟的MII期卵（IVM組）進行染色。采用 anti-α-tubulin-FITC對微管紡錘體進行免疫熒光染色，PI對染色體進行染色。用Confocal進行免疫熒光觀察并分別統(tǒng)計其紡錘體，染色體異常率；以及統(tǒng)計IVF FF組和ICSI NF組卵子激活率的差異。
　　 結果：一共有164個未受精卵子（其中IVF FF 93個，ICSI NF 71個）和56個IVM卵子參與實驗，IVF FF組

9、卵子紡錘體異常率和染色體異常率均顯著高于ICSI NF組和IVM組(異常紡錘體率分別為 80.6％、64.8％、57.1％；異常染色體率分別為91.4％、80.3％、75％)，差異有顯著性。而ICSI NF組與IVM組相比紡錘體和染色體異常率均沒有統(tǒng)計學差異。IVF FF組和ICSI NF組卵子激活障礙的比率兩組分別為16.1％、49.3％，差異有極顯著性。
　　 結論： (1)IVF受精率低或者受精失敗，卵母細胞的隱匿性異常

10、發(fā)揮重要作用(2)紡錘體和染色體是反映卵母細胞質量的微觀結構，卵母細胞質量對卵胞漿內單精子注射的影響，是遲救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精，或者受精后優(yōu)胚率，妊娠率低的重要原因。(3)IVF受精失敗組MII期卵母細胞紡錘體和染色體異常率明顯高于男性因素行ICSI未受精組（P<0.05），卵母細胞的質量是其重要影響因素，也說明了臨床上前次IVF受精失敗組此次行后續(xù)性ICSI治療植入率和妊娠率仍然顯著低于因男性因素行ICSI組