食管鱗狀細胞癌SPOCK1高表達的臨床意義及其促轉(zhuǎn)移的作用研究.pdf

1、目的：
　　食管癌是常見的消化道惡性腫瘤，其侵襲性較高、腫瘤生長迅速，因此早期即可發(fā)生轉(zhuǎn)移，這也是其死亡率較高的原因之一。食管癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，與很多基因和分子的變化密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，睪丸蛋白多糖(SPOCK1)在某些正常組織中低表達，而在相應的腫瘤組織中則表達上調(diào)。有文獻報道，核基質(zhì)結(jié)合蛋白（SATB1）與很多惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究小組前期的預實驗結(jié)果表明，SATB1與食管鱗狀細胞癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，且

2、基因芯片顯示SPOCK1位于SATB1的下游。目前國內(nèi)尚無有關(guān)SPOCK1與食管癌、SATB1與SPOCK1關(guān)系的研究。本研究通過檢測食管鱗癌患者癌組織及癌細胞系中SPOCK1的表達、siRNA干擾SPOCK1表達后對細胞遷移侵襲能力的變化及SATB1對SPOCK1表達的影響，旨在探討SPOCK1與食管癌生物學特性及其與SATB1之間的調(diào)控關(guān)系。
　　方法：
　　免疫組織化學方法檢測120例食管鱗狀細胞癌與食管炎性組織中SP

3、OCK1的表達差異；采用半定量RT-PCR、Western blot和細胞免疫熒光檢測SPOCK1在兩株不同侵襲性食管癌細胞株中的表達差異；構(gòu)建靶向SPOCK1的小分子RNA干擾載體，轉(zhuǎn)染人食管癌細胞系Eca109和TE13細胞，探究siRNA干擾SPOCK1表達后細胞遷移、侵襲能力的變化；構(gòu)建含SATB1序列的真核表達載體和靶向SATB1的小分子RNA干擾載體，分別瞬時轉(zhuǎn)染相對低表達SATB1、SPOCK1的食管癌細胞株ECA109和

4、相對高表達SATB1、SPOCK1的食管癌細胞株TE13，以半定量RT-PCR驗證其轉(zhuǎn)染效率，之后分別采用RT-PCR、Western blot檢測SPOCK1 RNA及蛋白水平的表達變化。
　　結(jié)果：
　　免疫組織化學結(jié)果表明，SPOCK1在炎性組織中的表達定位于細胞漿，在癌組織則同時表達于細胞漿和細胞核，且鱗狀細胞癌組陽性率明顯高于炎性組織組（陽性率比53.45％/44.00%，p<0.01）；數(shù)據(jù)表明，SPOCK1的高

5、表達與食管鱗狀細胞癌遠處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（陽性率已轉(zhuǎn)移組/未轉(zhuǎn)移組為86.67%/41.86%，p<0.01）；細胞免疫熒光結(jié)果表明，SPOCK1在低轉(zhuǎn)移潛能細胞系Eca109定位以胞漿為主，在高轉(zhuǎn)移潛能細胞系TE13定位以胞核為主；RT-PCR和WB結(jié)果表明SPOCK1在轉(zhuǎn)移潛能較低的食管癌細胞株Eca109中的表達低于轉(zhuǎn)移潛能較高的食管癌細胞株TE13(SATB1與SPOCK1在TE13細胞中的mRNA表達水平分別是ECA109的12.

6、04±0.13和56.12±0.41倍,p<0.05)；干擾細胞系TE13、Eca109中SPOCK1的表達后，細胞的遷移、侵襲能力明顯降低（TE13、ECA109實驗組與對照組進入下室的細胞數(shù)比值：遷移實驗分別為273±15vs475±10、102±11vs386±19，p<0.05；侵襲實驗分別為104±23vs382±27、275±11vs364±31；p<0.05）；過表達SATB1后的Eca109細胞系，SPOCK1的表達較對

7、照空載體組升高（轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后與對照組比較，二者分別升高108.84±0.430和37.78±0.82倍,p<0.05）；沉默SATB1后的TE13細胞系，SPOCK1的表達明顯低于對照空載體組(與對照組相比，SATB1和SPOCK1的抑制率分別為77.4%±0.08和63.5%±0.21，p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　SPOCK1在食管鱗狀細胞癌中高表達，且與其遠處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，并可能通過核轉(zhuǎn)位促進食管鱗狀細胞癌的轉(zhuǎn)移；S