β腎上腺素能受體介導THP-1單核細胞趨化因子受體2表達及遷移的影響.pdf

1、目的:β腎上腺素能受體阻滯劑對慢性精神應激所誘發(fā)的冠心病療效顯著,但機制不明。外周循環(huán)血液中淋巴細胞膜上含有高密度β2腎上腺能受體(β-AR),它是交感神經遞質對免疫系統(tǒng)進行調節(jié)的分子基礎。單核-巨噬細胞在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)冠心病不穩(wěn)定性斑塊內有大量巨噬細胞浸潤,其膜上也含有高密度的β2-AR。慢性精神應激時釋放的兒茶酚胺類激素是否與β-AR結合,由此調節(jié)單核-巨噬細胞功能和影響動脈粥樣斑塊的性質,國內

2、外未見類似研究。本項目以單核-巨噬細胞β-AR為研究對象,在細胞水平上,探討β-AR活性對人單核細胞(THP-1)趨化因子受體2(C Chemokine Receptor2,CCR2)表達及遷移的影響。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)THP-1細胞,實驗分為對照組、異丙腎上腺素組(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)、美托洛爾組(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)

3、、普萘洛爾組(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)。(2),不通濃度的異丙腎上腺素與THP-1細胞作用1小時后,與50mg/Lox-LDL共孵育24小時,采用Western blotting檢測THP-1細胞CCR2蛋白的表達,Transwell小室檢測THP-1細胞的遷移能力。(3)50μmol/L的異丙腎上腺素與THP-1細胞預孵育1h和不同濃度的美托洛爾預孵育1h后,與50mg/Lox-LD

4、L共孵育24小時,采用Western blotting檢測THP-1細胞CCR2蛋白的表達,Transwell小室檢測THP-1細胞的遷移能力。(4)50μmol/L的異丙腎上腺素與THP-1細胞預孵育1h和不同濃度的普萘洛爾預孵育1h后,與50mg/Lox-LDL共孵育24小時,采用Western blotting檢測THP-1細胞CCR2蛋白的表達,Transwell小室檢測THP-1細胞的遷移能力。
　　結果:(1)不同濃度

5、的異丙腎上腺素作用THP-1細胞1h小時,與50mg/Lox-LDL共孵育24小時后,結果顯示,1μmol/L、10μmol/L及50μmol/L異丙腎上腺素處理后,細胞CCR2蛋白水平明顯上調(P<0.05),細胞遷移能力明顯增強(P<0.05),并呈濃度依賴性;
　　(2)非選擇性β腎上腺素能受體阻滯劑普萘洛爾與受試細胞孵育24小時后能明顯阻滯異丙腎上腺素對CCR2蛋白表達以及細胞遷移能力的影響,呈劑量依賴性(P<0.05)。

6、而高濃度的美托洛爾(10μmol/L、50μmol/L)也能拮抗異丙腎上腺素的作用(P<0.05)。
　　結論:(1)通過β-AR介導,異丙腎上腺素能夠上調 ox-LDL誘導的THP-1細胞CCR2蛋白的表達,促進細胞的遷移。
　　(2)高濃度的美托洛爾和低濃度的普萘洛爾可以下調ox-LDL誘導的THP-1細胞CCR2蛋白的表達,抑制細胞的遷移,這一作用可能與阻斷β2-AR有關,為進一步研究β2-AR新功能和抗AS機制奠定基