甜瓜細菌性果斑病菌菌株哈17A致病相關(guān)基因lysR的克隆.pdf

1、甜瓜細菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch of Melon簡稱BFBM)是由燕麥嗜酸菌西瓜亞種(Acidovoraxavenae SUbsp．citrulli Willems et al，1992)引起的一種病害，可以嚴重危害西、甜瓜的葉片和果實，造成西瓜和甜瓜的大量減產(chǎn)，是國際規(guī)定的檢疫性植物病害之一。目前，對該病原菌致病機制的研究鮮有報道。本研究從遺傳學角度初步研究了該病原微生物的致病相關(guān)基因，為進一步研究該病

2、菌和宿主之間的互作提供了材料。 哈17A菌株為甜瓜的致病菌株，分離自新疆罹病甜瓜葉片。本研究運用16SrDNA序列同源性分析、特異性引物PCR和全細胞脂肪酸分析的方法，將菌株哈17A鑒定為A．a(chǎn)venae subsp．citrulli，同時對其部分生物學特性也進行了初步分析。 本研究利用三親雜交的方法將帶有抗卡那標記的Tn5轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)入甜瓜果斑病菌哈17A的細胞中，轉(zhuǎn)座子隨機插入到哈17A基因組DNA上，獲得突變體庫。利用

3、“葉片離體篩選法”篩選致病性減弱的突變體，從2000多個突變體中篩選到得到致病性明顯減弱的突變體5個。其中，通過“鳥槍法”成功克隆到突變體W-46的Tn5例翼序列。根據(jù)測序結(jié)果BLAST比對得知，該基因的產(chǎn)物與A．a(chǎn)venae subsp．citrulli AAC00-1中LysR家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白(LTTR)LysR的相似性達到100％，我們命名該基因為lysR。根據(jù)測序結(jié)果設(shè)計引物，擴增包含目標基因的一段序列，構(gòu)建互補載體，對突變菌

4、株W-46進行功能互補，得到了致病力恢復的互補菌株C-46，證明lysR基因與菌株哈17A的致病性密切相關(guān)。另外，lusR與哈17A菌株中其他致病性相關(guān)基因的關(guān)系有待進一步驗證。 本研究從傳統(tǒng)的植物病理學入手，建立了篩選燕麥嗜酸菌致病菌株哈17A突變體的篩選體系--離體葉片篩選法，優(yōu)化了研究燕麥嗜酸菌西瓜亞種致病性的遺傳學實驗方法，為燕麥嗜酸菌西瓜亞種的致病性分子遺傳機制的研究提供了研究基礎(chǔ)，具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價值。