RP-HPLC法對復方茯苓苷草湯中有效部位(群)的成分檢測.pdf

1、[目的]
　　 在對復方茯苓甘草湯防治常壓缺氧性肺動脈高壓有效部位(群)的研究取得階段性成果的基礎上，本課題擬將藥典[61]推薦并結合實驗條件所選擇的化學成分作為復方茯苓甘草湯的質(zhì)量控制指標，通過RP-HPLC技術，優(yōu)化有效部位(群)的色譜條件，對有效部位(群)檢測，建立有效部位(群)的色譜圖，同時結合藥效學研究，在一定程度上研究該方治療HPH的物質(zhì)基礎，為研制出安全有效、應用方便又便于質(zhì)控的治療HPH的中藥制劑打下一定的基礎；

2、為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化發(fā)展在方法學上提供一定的參考。
　　 [方法]
　　 實驗分為三個階段：藥液組分分離階段、單味藥的活性成分檢測階段、有效部位(群)活性成分檢測階段：
　　 1.藥液組分分離階段：
　　 用HP20型大孔吸附樹脂將復方茯苓甘草湯全方水煎液分離，分別用蒸餾水、30％乙醇、60％乙醇和95％乙醇洗脫，得到相應的四部分，揮盡回收溶劑后獲得提取物，轉溶，調(diào)整體積，罐封冷藏。
　　 2.單味藥

3、的活性成分檢測階段：
　　 2.1摸索并優(yōu)化復方中桃仁、桂枝、知母三味藥的主要活性成分的色譜條件
　　 2.2將確定的檢測條件應用于全方水煎液進行定性定量分析；
　　 3.有效部位(群)活性成分檢測階段：
　　 將上述檢測條件應用于60％洗脫液、95％洗脫液中進行檢測，并同時對30％洗脫液、蒸餾水洗脫液進行檢測，作定性定量分析，對比參考。
　　 [結果]
　　 1.確定三種活性成分的色譜條

4、件如下：
　　 1.1桃仁(苦杏仁苷)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.5％冰醋酸(25:75，v/v)，檢測波長：245nm；流速：1ml/min；柱溫：35℃；進樣量：20μL。
　　 1.2桂枝(桂皮醛)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：水-甲醇(55:45，v/v)，檢測波長：

5、285nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃：進樣量：20μL。
　　 1.3知母(芒果苷)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醛-1％冰醋酸(20:80，v/v)，檢測波長：320nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃；進樣量：20μL。
　　 2.建立了上述三種活性成分在復方茯苓甘草湯中的色譜圖；
　　 3.復方茯苓甘草湯中苦杏仁苷的含量為0

6、.1967mg.g-1
　　 4.復方茯苓甘草湯中桂皮醛苷的含量為20.21μg.g-1
　　 5.復方茯苓甘草湯中芒果苷的含量為0.236mg.g-1
　　 6.將上述的色譜條件應用于四種濃度的溶液進行檢測：
　　 6.1僅在30％液中檢測到苦杏仁苷，含量為0.18mg.g-1其余溶液中均未發(fā)現(xiàn)；
　　 6.2在四種溶液中均未發(fā)現(xiàn)桂皮醛；
　　 6.3在95％液，蒸餾水洗脫液中未發(fā)現(xiàn)芒果

7、苷，在60％液、30％液中發(fā)現(xiàn)芒果苷；但因為不在線性范圍內(nèi)，無法計算含量。
　　 [結語]
　　 (1)RP-HPLC法可以為復方茯苓甘草湯的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。
　　 (2)三個成分在復方茯苓甘草湯中的色譜圖可以作為復方茯苓甘草湯的質(zhì)量標準圖。
　　 (3)本實驗探索了中藥復方的物質(zhì)基礎，研究表明通過RP-HPLC法檢測中藥復方的物質(zhì)基礎是有意義的。
　　 (4)上述三點也為復方茯苓甘草湯的