糖尿病大鼠心肌微血管的改變與PAI-1mRNA相關性研究.pdf

1、糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)及其慢性并發(fā)癥已經(jīng)嚴重威脅到人們的健康。DM常并發(fā)血管及血栓性疾病。血栓前狀態(tài)分子標志物之一的纖溶活性指標—纖溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen Activator Inhibtor1，PAI-1)的變化與血栓形成密切相關。PAI-1是組織型纖溶酶原激活物(tissue Plasminogen Activator，t-PA)和尿激酶型纖溶酶原激活物(urine Plasmin

2、ogen Activator，u-PA)的特異性快速抑制劑。t-PA/PAI-1是調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)生理功能的一對重要產(chǎn)物，他們之間的生理平衡對調(diào)節(jié)血流暢通起到了重要作用。目前許多研究已經(jīng)闡明了糖尿病大血管病變、糖尿病腎病(DN)、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(DR)與PAI-1的密切相關性，而糖尿病心肌微血管病變與PAI-1關系尚未發(fā)現(xiàn)有關報道。流行病學研究顯示：臨床上一些糖尿病心絞痛的患者，排除了患者以前有冠狀動脈性心臟病或風濕性心臟病，并且排除年

3、齡、血壓、體重和血清膽固醇等危險因素，冠脈造影也顯示無明顯異常，經(jīng)過擴冠、活血化瘀、降脂治療后，癥狀明顯緩解。其機制之一可能是糖尿病時微血管內(nèi)皮損害及其炎性因子共同促進了心肌組織PAI-1mRNA的表達，心肌微血管內(nèi)PAI-1水平增加，t-PA/PAI-1調(diào)節(jié)失衡，局部纖溶活性受抑，血液呈現(xiàn)高凝狀態(tài)，微血栓形成，最終導致微血管病變。本研究通過建立糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病心肌微血管的改變與心肌組織PAI-1mRNA相關性，為臨床上對糖尿

4、病患者使用抗凝劑及糖尿病患者預防心血管疾病提供實驗依據(jù)。
　　 目的：建立糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病對心肌微血管的影響，研究糖尿病心肌微血管的改變與PAI-1mRNA相關性，并進一步探討增齡是否對心肌微血管及PAI-1mRNA表達有影響。
　　 方法：1.將老齡及青年雄性SD大鼠適應性喂養(yǎng)3天后，分別隨機分為老齡糖尿病造模組、老齡對照組、青年糖尿病組、青年對照組共4組，造模組以55mg/Kg劑量一次性腹腔注射STZ液。對

5、照組大鼠腹腔注射等量的檸檬酸鹽緩沖液。各組喂養(yǎng)72h后于尾尖部測空腹血糖。2.喂養(yǎng)8w后，處死大鼠，取部分左心室組織做免疫組化；剩余部分留做心肌組織PAI-1 mRNA檢測。3.采用EnVision免疫組化法，CD34抗體檢測心肌微血管內(nèi)皮細胞特異性抗原CD34。光學顯微鏡倍數(shù)：250×，視野面積0.034mm2，每個標本隨機觀測3個視野，采用醫(yī)學圖像分析軟件計數(shù)心肌微血管數(shù)目(棕黃色圓形、橢圓形或半橢圓形為一個微血管)。3.Real-

6、Time PCR(SYBR Green I)法檢測各組心肌組織PAI-1 mRNA的表達。
　　 結(jié)果：1.造模72h后，青年糖尿病組空腹血糖值顯著高于青年對照組(20.31±2.64 vs4.96±0.50，P＜0.01)；老齡糖尿病組空腹血糖值顯著高于老齡對照組(21.63±4.67 vs5.33±0.44，P＜0.01)。2.造模8W后，青年糖尿病組體重顯著低于造模前(193.36±11.72vs343.59±14.11，

7、P＜0.01)；老齡糖尿病組體重顯著低于造模前(284.81±15.58 vs532.90±13.28，P＜0.01)。3.免疫組化檢測大鼠心肌微血管數(shù)目結(jié)果：老齡糖尿病組心肌毛細血管數(shù)目與老齡對照組相比顯著減少(23.73±1.20 vs84.87±3.59，P＜0.01)；青年糖尿病組大鼠心肌微血管數(shù)目與青年對照組相比顯著減少(55.40±6.69 vs97.87±7.09，P＜0.01)；老齡糖尿病組大鼠心肌微血管數(shù)目顯著低于青年

8、對照組(23.73±1.20 vs97.87±7.09，P＜0.01)；老齡糖尿病組大鼠心肌微血管數(shù)目顯著低于青年糖尿病組(23.73±1.20 vs55.40±6.69，P＜0.01)；而老齡對照組大鼠心肌微血管數(shù)目與青年對照組相比無統(tǒng)計學差異(84.87±3.59vs97.87±7.09，P＞0.05)。4.心肌組織PAI-1mRNA的表達結(jié)果：各年齡段大鼠，糖尿病組心肌PAI-1mRNA相對表達量與同齡對照組相比顯著增多(P＜0.

9、01)；老齡糖尿病組大鼠心肌PAI-1mRNA相對表達量與青年糖尿病組相比顯著增多(P＜0.01)；老齡糖尿病大鼠心肌PAI-1mRNA相對表達量顯著高于青年對照組(P＜0.01)；老齡對照組大鼠心肌PAI-1mRNA相對表達量高于青年對照組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1.選用雄性SD大鼠，以1％鏈脲佐菌素(STZ，用0.1mol/L、pH4.2檸檬酸鹽緩沖液配制)按照55mg/Kg劑量腹腔注射，可成功建立糖尿病大鼠模型。2