神經(jīng)干細(xì)胞移植治療基底節(jié)腦出血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文神經(jīng)干細(xì)胞移植治療基底節(jié)腦出血的實(shí)驗(yàn)研究姓名：高俊瑋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師：方加勝20060301博士學(xué)位論文中文摘要面的進(jìn)展，體外培養(yǎng)技術(shù)已基本成熟。神經(jīng)干細(xì)胞移植做為一種有前景的治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的手段正受到越來(lái)越多的重視。本課題應(yīng)用比較成熟的神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)手段，在體外研究神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化特點(diǎn)。采用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)觀察腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的分布、遷移和分化，同時(shí)應(yīng)用R

2、T—PCR方法檢測(cè)腦出血后神經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)志物NestinmRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)，間接為神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦出血尋找適宜的移植時(shí)間窗。應(yīng)用體外分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞移植治療基底節(jié)腦出血模型，從基因水平、形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能恢復(fù)三個(gè)方面來(lái)研究神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)基底節(jié)腦出血的治療作用，為腦出血的治療探討新的途徑，為臨床應(yīng)用研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究包括以下三個(gè)部分：一、神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定及體外長(zhǎng)期培養(yǎng)目的利用無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)和細(xì)胞克隆培養(yǎng)技

3、術(shù)從大鼠胚胎腦組織中分離出神經(jīng)干細(xì)胞，并在體外進(jìn)行傳代培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化，建立神經(jīng)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化鑒定體系。方法對(duì)培養(yǎng)的不同代數(shù)的神經(jīng)干細(xì)胞分別進(jìn)行誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法觀察不同代數(shù)神經(jīng)干細(xì)胞克隆球中Nestin、NeuN、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞的比例，鑒定并定量研究培養(yǎng)的原代和傳代的細(xì)胞類(lèi)型。同時(shí)進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇的研究。結(jié)果隨著傳代次數(shù)增加，克隆球中Nestin陽(yáng)性細(xì)胞的比例無(wú)明顯變化，不同