Th17細(xì)胞在特應(yīng)性皮炎發(fā)病中作用機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　特應(yīng)性皮炎（atopicdermatitis,AD）作為兒童最常見(jiàn)的三大過(guò)敏性疾病之一，是一種慢性、瘙癢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病。AD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與遺傳易感基因、環(huán)境因素、免疫因素和皮膚屏障功能改變相關(guān)。長(zhǎng)期以來(lái)，普遍觀點(diǎn)認(rèn)為T(mén)h1/Th2功能失衡是AD發(fā)病的基礎(chǔ)，急性期表現(xiàn)為T(mén)h2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，慢性期則Th1細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)。然而Th1/Th2失衡理論并不能很好的解釋AD發(fā)病，隨著對(duì)機(jī)體抗微生物免疫機(jī)制的深入研究，新發(fā)現(xiàn)的

2、Th細(xì)胞家族成員Th17細(xì)胞成為國(guó)內(nèi)外研究的焦點(diǎn)。很多研究表明Th17細(xì)胞在自身免疫性炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用，2003年Toda等人首次報(bào)道AD患者急性皮損中高表達(dá)IL-17后，相繼有研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)AD患者皮損及外周血中Th17細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-17水平明顯高于正常人，提示Th17細(xì)胞在AD炎癥發(fā)生中有著重要作用，但具體機(jī)制尚不清楚。FK506（他克莫司）作為一種T細(xì)胞抑制劑，已廣泛用于AD治療，可明顯緩解AD癥狀，但其

3、是否通過(guò)Th17細(xì)胞途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)AD的治療尚不明確。SEB（金黃色葡萄球菌腸毒素B）作為金黃色葡萄球菌分泌的一種超抗原，誘發(fā)或加重AD的機(jī)制是否與Th細(xì)胞亞群改變有關(guān)也不清楚。
　　目的：
　　本研究通過(guò)檢測(cè)急性期中~重度AD患兒外周血Th細(xì)胞亞群比例，F(xiàn)K506和SEB對(duì)Th17細(xì)胞特異性核轉(zhuǎn)錄因子RORγt的作用及對(duì)PBMC(外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞)分泌細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的影響。以探討Th17細(xì)胞在AD

4、發(fā)病中的作用，以及FK506和SEB對(duì)其影響。
　　方法：
　　1.符合Hanifin-Rajka診斷標(biāo)準(zhǔn)的急性期中~重度AD患兒86例（男50，女36），SCORAD評(píng)分33~80，平均56.12±11.85，年齡0.25~14.75歲，平均5.39±4.04歲。健康對(duì)照組兒童81例（男48女33），年齡2.92~14.08歲，平均5.65±2.02歲。
　　2.本研究用PMA（佛波酯）+Ionomycin（離子霉素

5、）或SEB對(duì)AD患兒或健康對(duì)照PBMC進(jìn)行處理，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th細(xì)胞亞群比例；ELISA法檢測(cè)FK506和SEB對(duì)PBMC分泌細(xì)胞因子IFN-γ,IL-4，IL-17水平的影響，同時(shí)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)FK506和SEB對(duì)Th17細(xì)胞特異性核轉(zhuǎn)錄因子RORγt改變的影響。
　　結(jié)果：
　　1.PBMC中各Th細(xì)胞亞群比例：1）PMA+Ionomycin刺激PBMC后，AD患兒組外周血Th17、Th2細(xì)胞比例較

6、健康對(duì)照組顯著升高，Th1細(xì)胞比例較健康對(duì)照組顯著降低。AD患兒組與健康對(duì)照組比較，Th17細(xì)胞比例升高（1.30±0.62vs0.63±0.27，p<0.001），Th1細(xì)胞比例降低（9.16±4.21vs20.07±5.13，p<0.001），Th2細(xì)胞比例升高（9.16±4.21vs20.07±5.13，p<0.001），有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。2）SEB干預(yù)后，比較AD患兒組和健康對(duì)照組Th亞群表達(dá)，Th17細(xì)胞比例均很低（0.19±

7、0.14vs0.24±0.20，p>0.05），無(wú)明顯差異，Th1細(xì)胞比例AD組明顯低于對(duì)照組（3.43±1.88vs10.08±3.96，p<0.001），Th2細(xì)胞比例AD組明顯高于對(duì)照組（2.38±2.33vs0.57±0.33，p<0.001）。
　　2.FK506和SEB對(duì)RORγtmRNA表達(dá)的影響：1）AD患兒組RORγtmRNA表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組（2.64±2.31vs0.83±0.44，p<0.01）。2）F

8、K506對(duì)RORγtmRNA表達(dá)水平的影響：FK506干預(yù)后AD患兒組和健康對(duì)照組RORγtmRNA表達(dá)均降低。AD患兒FK506干預(yù)組低于未干預(yù)組（0.26±0.23vs2.64±2.31，p<0.001），健康對(duì)照FK506干預(yù)組低于未干預(yù)組（0.20±0.18vs0.83±0.44，p<0.001）。3）SEB對(duì)RORγtmRNA表達(dá)水平的影響：SEB干預(yù)后AD患兒組RORγtmRNA水平明顯高于健康對(duì)照組（1.51±1.05vs

9、0.39±0.28，p<0.001）。
　　3.FK506和SEB對(duì)PBMC分泌細(xì)胞因子的影響：1）未經(jīng)干預(yù)的AD患兒組IL-17和IL-4水平均明顯高于對(duì)照組，IFN-γ水平明顯低于健康對(duì)照組。AD患兒組與健康對(duì)照組比較，IL-17水平升高（638.01±152.85vs369.57±107.22，p<0.001），IFN-γ水平降低（653.53±133.80vs1123.66±218.36，p<0.001），IL-4水平升高

10、（537.15±160.73vs294.30±59.01，p<0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2)FK506對(duì)PBMC分泌細(xì)胞因子的影響：FK506干預(yù)后，AD患兒組和健康對(duì)照組IL-17、IFN-γ、IL-4水平均明顯降低。①IL-17水平：AD患兒FK506干預(yù)組低于未干預(yù)組（160.87±65.63vs638.01±152.85，p<0.001），健康對(duì)照FK506干預(yù)組低于未干預(yù)組（147.66±67.69vs369.57±10

11、7.22，p<0.001）；②IFN-γ水平：AD患兒FK506干預(yù)組明顯低于未干預(yù)組（305.87±86.16vs653.53±133.80，p<0.001），健康對(duì)照FK506干預(yù)組明顯低于未干預(yù)組（380.67±128.54vs1123.66±218.36，p<0.001）;③IL-4水平：AD患兒FK506干預(yù)組明顯低于未干預(yù)組（61.36±33.48vs537.15±160.73，p<0.001），健康對(duì)照FK506干預(yù)組明顯

12、低于未干預(yù)組（134.12±34.71vs294.30±59.01，p<0.001）。3）SEB對(duì)PBMC分泌細(xì)胞因子的影響：AD患兒組與健康對(duì)照組比較，IL-17和IL-4水平明顯升高，IFN-γ水平明顯降低。AD患兒組IL-17水平明顯高于健康對(duì)照組（593.50±119.16lvs284.23±84.69，p<0.001）,IFN-γ水平明顯低于健康對(duì)照組548.46±99.70vs943.98±254.07，p<0.001），I

13、L-4水平明顯高于健康對(duì)照組462.71±109.63vs274.51±48.67，p<0.001）。
　　結(jié)論：
　　1.急性期中~重度AD患兒外周血Th細(xì)胞亞群存在比例失衡，AD患兒組Th17、Th2細(xì)胞比例較健康對(duì)照組升高，Th1細(xì)胞比例較健康對(duì)照組降低；PBMC分泌的細(xì)胞因子IL-17和IL-4水平AD組明顯高于對(duì)照組，IFN-γ明顯低于對(duì)照組，反映AD患兒體內(nèi)存在Th細(xì)胞亞群失衡，急性期表現(xiàn)為T(mén)h17細(xì)胞和Th2細(xì)

14、胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)。
　　2.檢測(cè)AD患兒和健康對(duì)照外周血Th17細(xì)胞特異性核轉(zhuǎn)錄因子RORγtmRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其在AD患兒外周血中表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組，提示急性期AD患兒存在Th17細(xì)胞高表達(dá)。在AD患兒組和健康對(duì)照組中，F(xiàn)K506對(duì)RORγtmRNA表達(dá)均有顯著抑制作用，提示FK506降低Th17細(xì)胞分化可能是緩解AD急性炎癥反應(yīng)的機(jī)制之一。
　　3.AD患兒PBMC經(jīng)SEB處理后，Th細(xì)胞亞群失衡，表現(xiàn)為T(mén)h17、Th2細(xì)