LPS誘導PC12細胞損傷的機制及EPA的防護作用研究.pdf

1、帕金森病是一種常見于老年人的慢性退行性疾病，其最具特征性的神經(jīng)病理學變化是DA能神經(jīng)元的進行性缺失和特征性的Lewy’s小體的形成。近年來對PD的實驗研究取得了突破性的進展，但其確切機制仍然不明確。自1988年McGee等在PD患者的中腦黑質致密帶(SNpc)中發(fā)現(xiàn)了激活的小膠質細胞后，以小膠質細胞激活為特征的神經(jīng)免疫炎癥機制開始受到關注。
　　小膠質細胞(microglia，MI)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervessys

2、tem,CNS)內的主要免疫效應器，在腦內各部都有分布，尤以黑質分布最多。在炎癥、缺血及中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病中發(fā)揮作用。脂多糖是革蘭陰性菌細胞壁的主要組成成分，是一種強烈的致炎因子。目前，關于LPS誘導的小膠質細胞活化的體內和體外實驗開展的很多，但其確切的機制卻仍然不清。
　　二十碳五烯酸(EicosapentaenoicAcid,EPA)，是n-3系多不飽和脂肪酸(n-3PUFAs)的一種，其天然來源是海洋動物。EPA有五個不飽

3、和鍵和4個活潑的亞甲基，這使得EPA極易受光、熱、金屬元素及自由基的影響。許多研究發(fā)現(xiàn)，EPA具有抗炎、預防心血管疾病、降脂和抑制腫瘤生長等方面的作用，其中抗炎作用受到廣泛關注，但其確切機制仍然不明確。
　　目的：
　　通過LPS直接作用于PC12細胞，觀察LPS對PC12細胞的影響；建立PC12細胞與BV-2細胞共培養(yǎng)體系，觀察LPS對PC12細胞的影響和對BV-2細胞的活化；觀察EPA對LPS誘導的BV-2細胞活化的影響

4、及其可能的機制。
　　方法：
　　1．通過體外培養(yǎng)PC12細胞，以不同濃度LPS(0.1μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL)作用24h，MTT法檢測細胞活力、流式細胞術檢測細胞凋亡、比色法測定培養(yǎng)基中LDH的含量、Western-blot檢測細胞中TH的表達；
　　2．建立BV2細胞和PC12細胞共培養(yǎng)模型，以不同濃度LPS(0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL)作用24h，流式

5、細胞術檢測PC12細胞的凋亡、比色法測定培養(yǎng)基中LDH的含量、E-lisa檢測培養(yǎng)基中TNF-α、IL-1β的含量、Western-blot檢測細胞中TH的表達；
　　3．體外培養(yǎng)BV2細胞，以不同濃度LPS(0.1μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL)作用24h，觀察BV-2細胞形態(tài)學的變化、免疫熒光染色觀察細胞OX-42蛋白的表達、Western-blot檢測NF-κBp65和I-κB蛋白的表達、E-

6、lisa檢測培養(yǎng)基中TNF-α、IL-1β的含量；
　　4．體外培養(yǎng)BV-2細胞，以不同濃度EPA(25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)作用1h，LPS(1μg/mL)處理24h后，Western-blot檢測NF-κBp65和I-κB蛋白的表達、E-lisa檢測培養(yǎng)基中TNF-α、IL-1β的含量；
　　結果：
　　1．LPS作用于PC12細胞時，對其凋亡、TH表達和LDH的釋放都沒有顯著性影響；

7、
　　2．LPS損傷了共培養(yǎng)體系中的PC12細胞，與對照組相比，培養(yǎng)液中LDH釋放量顯著增加(P<0.05)、凋亡率顯著增高(P<0.05)、TH表達顯著降低(P<0.05)；
　　3．LPS作用于BV-2細胞24h，同對照相比，免疫熒光染色OX-42顯示熒光顆粒顯著增多。細胞內NF-κBp65隨著LPS濃度的增加表達增加，而I-κB則隨著LPS濃度的增加表達降低，同對照組相比，0.5μg/mLLPS組和1μg/mLLPS組

8、差異具有顯著性(P<0.05)。培養(yǎng)基中TNF-α、IL-1β的濃度均隨著LPS濃度的增加而濃度增高，同對照組相比，0.5μg/mLLPS組和1μg/mLLPS組差異具有顯著性(P<0.05)；
　　4．EPA抑制BV-2細胞的活化：與LPS組相比，100μmol/LEPA組NF-κBp65的表達顯著降低(P<0.05)，而I-κB的表達則顯著增高(P<0.05)；50μmol/LEPA組和100μmol/LEPA組培養(yǎng)基中TNF