Stat1在進展期胰腺癌中作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在研究Stat1在胰腺癌進展中的相關(guān)作用，探討其與P21及VEGF、MMP2、MMP9的關(guān)系，為進一步的臨床試驗提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.人胰腺癌組織中Stat1及P21的檢測。擬利用免疫組織化學染色方法觀察腫瘤組織及其癌旁組織中Stat1及P21表達的差異，同時分析有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中Stat1及P21的表達水平是否具有差異，并檢測其相關(guān)性。
　　2.體外細胞實驗:培養(yǎng)人胰腺癌細胞株

2、BxPC-3，并將其分為三組，Stat1-siRNA轉(zhuǎn)染組、shRNA轉(zhuǎn)染組及空白組，前兩組分別轉(zhuǎn)染Stat1-siRNA質(zhì)粒、shRNA質(zhì)粒，Western-blotting驗證轉(zhuǎn)染效果及VEGF，MMP2和MMP9表達，遷移實驗和Transwell侵襲實驗分析Stat1下調(diào)表達后胰腺癌細胞遷移能力和侵襲能力的變化，MTT檢測其增殖能力。
　　結(jié)果：
　　1.82例人胰腺癌組織(82％)表達Stat1蛋白，而72例(72％

3、)表達p21蛋白。Stat1蛋白的表達與胰腺癌的腫瘤分化，臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈逆相關(guān)(P＜0.005)，而對年齡，腫瘤大小或侵襲情況無明顯相關(guān)性。而且p21蛋白的表達也與胰腺癌的腫瘤分化，臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈逆相關(guān)(P值分別為＜0.005，0.025和0.05)，而對年齡，腫瘤大小或侵襲情況無明顯相關(guān)性。Stat1蛋白和p21蛋白在胰腺癌組織中表達呈正相關(guān)(P＜0.001)。
　　2.成功將Stat1-siRNA質(zhì)粒、sh

4、RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞株。MTT試驗發(fā)現(xiàn)siStat1組的增殖明顯增加。Transwell試驗證實SiStat1組中侵襲細胞的數(shù)量與Stat1組以及對照組相比明顯增加。Western試驗顯示VEGF，MMP2和MMP9在siStat1組的表達水平明顯高于Stat1組的水平
　　結(jié)論：
　　1.Stat1和p21的表達呈陽性相關(guān)（共表達于腫瘤細胞），而Stat1和p21蛋白的失表達與腫瘤失分化，腫瘤進展期和胰腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

5、相關(guān)。與年齡和腫瘤大小或腫瘤侵襲無明顯相關(guān)。Stat1和p21蛋白表達的缺失也與胰腺癌患者較差的總生存期相關(guān)。本研究提示Stat1和p21蛋白能夠作為生物標記物來對預(yù)測胰腺癌進展和預(yù)后做進一步評估。
　　2.通過轉(zhuǎn)染STAT1特異性siRNA沉默了STAT1的表達，并檢測了在不同組人BxPC-3細胞中VEGF，MMP2和MMP9表達的相對水平。并且發(fā)現(xiàn)在si-STAT1組中VEGF，MMP2和MMP9表達的水平明顯高于Stat1組