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文檔簡介
1、第一部分:不同劑量利多卡因對老年大鼠POCD行為學影響
目的:通過脾切除構建老年大鼠術后認知功能障礙(POCD)模型,探索老年大鼠 POCD模型形成及維持時間,并以局部麻醉藥利多卡因作為研究工具,研究利多卡因對學習記憶功能損傷的改善作用,確定利多卡因改善POCD的最佳劑量。
方法:將50只老年SD大鼠,使用CHISS統(tǒng)計學軟件隨機分成5組,組別分別為:對照組、POCD模型組、利多卡因1組(1mg/kg/h)、利多卡因
2、2組(2mg/kg/h)、利多卡因3組(4mg/kg/h),每組10只。進行連續(xù)5天的空間獲得性實驗后,第6天對各組老年SD大鼠進行模型構建和利多卡因干預。所有老年SD大鼠均在術后第1、3、7、14天利用Morris水迷宮對老年大鼠的空間記憶能力進行測試。
結果:空間獲得性實驗會使老年大鼠的學習記憶能力隨著時間的延長而逐漸提高(P<0.01)、并在第5天趨于穩(wěn)定,且每天各組之間的沒有明顯差異。參考記憶的測試結果顯示,與對照組相
3、比, POCD模型組和利多卡因3組(4mg/kg/h)的參考記憶能力明顯降低(P<0.05);與POCD模型組相比,利多卡因1組(1mg/kg/h)和利多卡因3組(4mg/kg/h)的參考記憶能力明顯增強(P<0.05)。
工作記憶的測試結果顯示,與對照組相比, POCD模型組、利多卡因1組(1mg/kg/h)術后第1、3天,利多卡因3組(4mg/kg/h)術后第1、3、7天的工作記憶能力有顯著差異(P<0.05);與POCD
4、模型組比較,利多卡因1、2組(1、2mg/kg/h)的術后第1、3天和利多卡因3組(4mg/kg/h)的術后第1天的工作記憶能力有顯著差異(P<0.05)。
結論:麻醉狀態(tài)下脾切除能夠成功建立 POCD模型,且空間記憶能力的損害在術后第3天最明顯,術后第7天基本恢復正常,而圍術期尾靜脈持續(xù)泵注1h的1mg/kg/h利多卡因對構建POCD模型后的老年大鼠空間記憶能力的改善作用最明顯,被確定為最佳治療劑量。
第二部分:最
5、佳劑量利多卡因對POCD老年大鼠海馬組織和外周血炎癥反應的影響
目的:通過分子生物學和免疫組織化學技術,觀察最佳劑量利多卡因對POCD老年大鼠海馬和外周血炎癥反應的影響,探索中樞和外周炎癥反應與海馬星形膠質細胞激活和表達變化的機制。
方法:確定量效關系和利多卡因的最佳劑量后,將72只老年SD大鼠,使用CHISS統(tǒng)計學軟件隨機分成3組,組別分別為:對照組、POCD模型組、利多卡因組(1mg/kg/h)。使用54只進行M
6、orris水迷宮實驗,每組18只,進行連續(xù)5天的空間獲得性實驗后,第6天對各組老年SD大鼠進行模型構建和利多卡因干預,術后第1、3、7天對老年大鼠的空間記憶能力進行測試。使用18只進行新物體識別實驗,每組6只,術后第1天對老年大鼠的非空間記憶能力進行測試。所有老年大鼠均在術后第1、3、7天取材,采用ELISA的方法對老年大鼠海馬組織和外周血漿炎癥細胞因子進行檢測,采用組織免疫熒光染色和蛋白免疫印跡的方法觀察老年SD大鼠海馬組織中星形膠質
7、細胞激活和GFAP表達的情況。
結果:確定利多卡因的最佳治療劑量為1mg/kg/h后,不僅使用Morris水迷宮實驗評價老年大鼠的空間記憶能力,還用新物體識別實驗評價非空間記憶能力,其結果顯示,與對照組相比,POCD模型組老年大鼠識別指數有顯著差異(P<0.05);與 POCD模型組對比,利多卡因組(1mg/kg/h)老年大鼠新物體識別指數有顯著差異(P<0.05)。
測定炎癥細胞因子結果顯示,關于促炎因子,與對照組
8、相比,POCD模型組術后第1天和第3天老年大鼠海馬和血漿中的TNF-α、IL-1β和IL-6濃度分別有顯著差異(P<0.05);與POCD模型組相比,1mg/kg/h利多卡因干預后,術后第1天和第3天老年大鼠海馬和血漿中的TNF-α、IL-1β和IL-6濃度分別有顯著差異(P<0.05)。而抗炎因子IL-10,與對照組相比,POCD模型組在術后第1、3天的海馬和血漿中的IL-10濃度分別有顯著差異(P<0.05);與POCD模型組相比,
9、利多卡因組(1mg/kg/h)術后第3天海馬和血漿中的IL-10濃度有顯著差異(P<0.05)。
組織免疫熒光染色法和蛋白免疫印跡法測定老年大鼠海馬組織星形膠質細胞標志物GFAP的結果顯示,與對照組相比,POCD模型組術后第1天和第3天海馬組織中GFAP的表達有顯著差異(P<0.05),且GFAP免疫熒光強度增加;與POCD模型組相比,利多卡因組(1mg/kg/h)術后第3天海馬組織中GFAP的表達有顯著差異(P<0.05),
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