PARP-1在前列腺癌中表達的意義及其在前列腺癌PC3細胞株增殖中的作用研究.pdf

1、目的:
　　探討中國人群中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）及其活性產(chǎn)物聚腺苷二磷酸核糖（PAR）在前列腺癌及良性前列腺增生組織中的表達及意義；研究PARP-l特異性小分子干擾RNA(siRNA)對雄激素非依賴性前列腺癌PC3細胞株增殖的影響及其作用機制，為前列腺癌的治療提供一個新的思路。
　　方法:
　　應用免疫組織化學SP法檢測并比較PARP-1和PAR在78例前列腺癌和49例前列腺增生組織中的表達，分析

2、其在前列腺癌中與血清TPSA(TPSA＞20及TPSA≤20)的關系，及其在高分化前列腺癌（Gleason評分≤6分）和低分化前列腺癌（Gleason評分≥8分）組織中的表達差異。同時，設計合成3條PARP-l特異性siRNA序列，進行脂質(zhì)體轉染后，通過RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡法檢測其對PARP-l的干擾效果，篩選出最佳干擾效果的2條siRNA序列；通過單溶液細胞增殖檢測法檢測干擾PC3細胞內(nèi)源性PARP-l表達對細胞增殖的影響，并檢測

3、細胞內(nèi)Akt及其下游GSK3β活化水平的變化。
　　結果:
　　1、PARP-1及PAR主要表達于前列腺癌及前列腺增生組織中細胞核中，幾乎不在細胞質(zhì)中表達。PARP-1及PAR在前列腺癌組織中表達的陽性率及強陽性率均顯著高于前列腺增生組織（P＜0.05）。
　　2、盡管PARP-1或PAR在前列腺癌患者PSA＞20ng/ml組中的陽性及強陽性表達高于PSA≤20ng/ml組，但并無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。同樣，PA

4、RP-1或PAR在前列腺癌患者Gleason評分≥8組中的陽性及強陽性表達高于Gleason評分≤6組，但亦并無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　3、PARP-1特異性干擾序列siRNA-1706、siRNA-2003和siRNA-2907均可以明顯抑制PARP-l mRNA和蛋白的表達(P<0．05)。其中siRNA-1706的干擾效果最好，siRNA-2907的干擾效果最弱，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。
　　4、轉

5、染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003均可以明顯抑制PC3細胞增殖，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0．01)。
　　5、轉染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003在明顯抑制PARP-l表達的同時，也明顯抑制Akt(Ser473位點)及其下游 GSK3β(Ser9位點)的磷酸化，但對總Akt1和GSK3β的表達并無明顯影響。
　　結論:
　　1、PARP-1及其活性產(chǎn)物PAR在前列腺癌組織

6、中的表達較良性前列腺增生組織中明顯增高，表明其可能在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
　　2、PARP-1及PAR與前列腺癌患者血清TPSA及Gleason評分無明顯相關性，但有隨著TPSA及Gleason評分增高而表達增高的趨勢，表明其可能作為前列腺癌進展的標志物，但仍需進一步驗證。
　　3、PARP-l特異性siRNA可以明顯干擾PC3細胞內(nèi)源性PARP-l的表達并抑制細胞增殖，該抑制作用與Akt的活化抑制以及其下游GSK