PKH26標記單核細胞衍生的肝樣細胞裸鼠體內(nèi)示蹤的實驗研究.pdf

1、第一部分體外細胞因子聯(lián)合誘導人外周血單核細胞分化為肝樣細胞的實驗研究
　　 目的：
　　 探討肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)和成纖維細胞生長因子-4(fibroblast growth factor-4，F(xiàn)GF-4)體外聯(lián)合誘導人外周血單核細胞向肝樣細胞分化的能力及分化后的細胞是否具有肝樣細胞的典型形態(tài)和生化特征。
　　 方法：
　　 密度梯度離心法和細胞貼壁篩

2、選法從外周血中分離并初步純化所獲取的單核細胞用于培養(yǎng)，誘導。實驗分別設(shè)立A，B兩組。A組為陰性對照組，在細胞培養(yǎng)過程中不添加細胞分化誘導因子HGF和FGF-4；B組應(yīng)用HGF和FGF-4體外聯(lián)合誘導人外周血單核細胞向肝樣細胞分化。在不同分化階段觀察細胞形態(tài)特征的變化及采用免疫熒光細胞化學染色法檢測細胞甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)和細胞角蛋白19(cytokeratin19，CK19)表達的情況
　　 結(jié)

3、果：
　　 A組細胞隨培養(yǎng)時間延長由剛分離出的單核細胞呈較均一的圓形逐漸變得不規(guī)則，呈條索狀，纖維樣改變，少部分細胞呈圓形，細胞發(fā)生凋亡，裂解；B組細胞隨誘導分化培養(yǎng)時間延長，細胞變大，變圓，呈集落生長，增殖活性強。于誘導2周后具有典型肝樣細胞形態(tài)。免疫熒光細胞化學染色法檢測A組細胞AFP和CK19表達呈陰性，而B組有AFP和CK19陽性表達，于誘導2周后AFP和CK19陽性表達最為明顯
　　 結(jié)論：
　　 在H

4、GF和FGF-4體外聯(lián)合誘導條件下，人外周血單核細胞具有向肝樣細胞分化的潛能及分化后的細胞具有肝樣細胞的典型形態(tài)和生化特征。
　　 第二部分 PKH26標記單核細胞分化的肝樣細胞裸鼠體內(nèi)示蹤的實驗研究
　　 目的：
　　 探討PKH26標記單核細胞衍生的肝樣細胞移植受體鼠肝組織過程中的有效示蹤劑，并進一步觀察移植后的肝樣細胞存活，分布與轉(zhuǎn)歸情況。
　　 方法：
　　 以紅色熒光染料PKH26標記單

5、核細胞衍生的肝樣細胞，尾靜脈注入受體鼠體內(nèi)作為實驗組。對照組注射等量生理鹽水，分別于移植2周后取肝組織，通過熒光顯微鏡觀察實驗組肝樣細胞向肝臟遷移與轉(zhuǎn)歸的情況。采用免疫熒光細胞化學染色法檢測移植的肝樣細胞白蛋白(albumin，ALB)的表達。
　　 結(jié)果：
　　 動物實驗組受體鼠肝組織冰凍切片中可見大量PKH26標記陽性的肝樣細胞，這些細胞主要分布在肝索區(qū)，并在肝索區(qū)的肝細胞間發(fā)生整合，于移植2周后行免疫熒光細胞化學染