Galectin-3通過EGFR介導(dǎo)調(diào)控腫瘤細(xì)胞e-cadherin表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、半乳糖凝集素(galectin)家族是哺乳動(dòng)物β-半乳糖苷連接蛋白，與β-半乳糖苷有很強(qiáng)的親和力，并且都含有一段保守的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(carbohydraterecognition domain，CRD)。半乳糖凝集素-3(galectin-3)是galectin家族中唯一的嵌合型代表，含有1個(gè)CRD和12個(gè)氨基酸殘基組成的N端結(jié)構(gòu)域。Galectin-3蛋白含251個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)量為31，000 Da，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的凋亡、粘附

2、、增殖和血管形成。Galectin-3具有各種各樣的生物功能是因?yàn)槠鋸?fù)雜的細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)分布，使它能與各種不同的配體結(jié)合產(chǎn)生生物效應(yīng)。
　　細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs)，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞之間和細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的反應(yīng)參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程。基于序列同源性和結(jié)構(gòu)不同，CAMs家族分成以下幾類:鈣粘蛋白(cadherin)，選擇素(selectin)，整合素(integrin)，免疫球蛋白超家

3、族，淋巴細(xì)胞尋靶受體，如CD44。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)是經(jīng)典鈣粘蛋白中的原型成員，在保持上皮細(xì)胞極性和完整性方面發(fā)揮特別重要的作用。在細(xì)胞外，毗鄰細(xì)胞的兩個(gè)E-cadherin分子通過其細(xì)胞外部分含有鈣離子的五個(gè)重復(fù)序列片段結(jié)合，形成黏著斑。在細(xì)胞內(nèi)，E-cadherin通過α-，β-，和p-120 catenin與細(xì)胞骨架連接。
　　本論文研究galectin-3和E-cadherin這兩個(gè)腫瘤因子的內(nèi)在聯(lián)系及其

4、調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生的機(jī)制，而EGFR通路與galectin-3和E-cadherin都有緊密的聯(lián)系，所以我們首先探討了EGF誘導(dǎo)對(duì)二者聯(lián)系的必要性。MTT實(shí)驗(yàn)顯示，無論EGF的刺激與否，galectin-3抑制劑β-Lactose都能抑制腫瘤細(xì)胞A549的增殖，所以， EGF刺激對(duì)于galectin-3的抗凋亡是無關(guān)緊要的。但劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，EGF可以誘導(dǎo)A549的遷移，western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示只有在EGF存在時(shí)，gale

5、ctin-3對(duì)E-cadherin的表達(dá)才有影響，我們研究的E-cadherin主要參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，所以我們選擇EGF誘導(dǎo)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用western blotting摸索EGF誘導(dǎo)EGFR磷酸化的時(shí)間相關(guān)性，結(jié)果顯示，在15min時(shí)，p-EGFR表達(dá)最高，為使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更明顯，后續(xù)都采用EGF誘導(dǎo)15min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　Western blotting結(jié)果顯示在EGF誘導(dǎo)下，在高表達(dá)galectin-3的人乳腺癌細(xì)胞MC

6、F-7和人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116中，β-Lactose下調(diào)E-cadherin和β-catenin的表達(dá)，而在低表達(dá)galectin-3的A549細(xì)胞中，β-Lactose對(duì)E-cadherin和β-catenin的表達(dá)無影響。結(jié)果表明，細(xì)胞表面的galectin-3上調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)E-cadherin和β-catenin的表達(dá)。
　　Western blotting結(jié)果顯示在EGF誘導(dǎo)下，外源性的人重組galectin-3下調(diào)A

7、549中E-cadherin的表達(dá)，上調(diào)β-catenin的表達(dá)。為了進(jìn)一步證明galectin-3調(diào)節(jié)β-catenin的具體機(jī)制，分別提取A549細(xì)胞中胞漿和胞核蛋白后進(jìn)行westernblotting實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示galectin-3可促使β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核。另外，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示，外源性galectin-3對(duì)E-cadherin/β-catenin復(fù)合體沒有顯著影響。這些結(jié)果表明，外源性galectin-3下調(diào)腫瘤細(xì)