臭氧對(duì)口腔綜合治療臺(tái)水道系統(tǒng)中HBV滅活效果的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討能夠限時(shí)滅活口腔綜合治療臺(tái)水道中乙肝病毒的最低臭氧溶液濃度。擬用多種方法控制溶液的臭氧濃度的穩(wěn)定，將配制的不同濃度臭氧溶液同人肝癌細(xì)胞系(HepG2)的2.2.15細(xì)胞共同培養(yǎng)后提取其上清液，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，熒光定量(FQ-PCR)檢測(cè)HVB-DNA的濃度，對(duì)各濃度臭氧溶液的滅活效果進(jìn)行比較。并觀察并不同濃度臭氧溶液對(duì)正?？谇簧掀ぜ?xì)胞的影響。為臭氧在DUWLs的感染控制的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：1

2、、臭氧溶液的配置與濃度衰減實(shí)驗(yàn)；
　　2、HepG2.2.15細(xì)胞的培養(yǎng)：常規(guī)培養(yǎng)HepG2.2.15細(xì)胞；
　　3、不同濃度的臭氧溶液對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞株表達(dá)物的作用；
　　4、臭氧溶液對(duì)正常口腔組織的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)；
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，兩組組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：1、不同封閉條件和放置時(shí)間的臭氧濃度變化：臭氧溶液放置30min后，各組濃度

3、變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.77，P<0.01)。在密封條件下，水溫為5℃和水溫為10℃時(shí)臭氧濃度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=1.36，P>0.05)；密封條件下，水溫為5℃與水溫20℃時(shí)臭氧濃度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=4.88，P<0.01)。水溫為5℃時(shí)，密封和非密封臭氧濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.59，P>0.05)；水溫為20℃時(shí)，密封和非密封臭氧濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=3.37，P<0.01)。
　　2、臭氧溶液對(duì)

4、HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBV-DNA含量PCR熒光結(jié)果示：臭氧溶液能夠明顯減少HepG2.2.15上清液中HBV-DNA含量。相同時(shí)間內(nèi)不同濃度臭氧溶液對(duì)HBV-DNA含量的影響不同，臭氧溶液濃度越大，其對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞HBV-DNA的表達(dá)抑制越明顯。
　　3、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HVB-DNA檢測(cè)結(jié)果：臭氧溶液組比超純水對(duì)照組HBV-DNA量明顯降低。在臭氧作用1min時(shí)，臭氧濃度為1.5mg/L組和其他各組相比

5、，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；臭氧分別作用5、10、15、30min時(shí)，各組臭氧溶液均能降低HVB-DNA含量，超純水組和其他各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；臭氧作用15min后，臭氧溶液各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。
　　4、臭氧溶液對(duì)Hela細(xì)胞作用的細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察：經(jīng)倒置顯微鏡檢測(cè)Hela細(xì)胞貼壁生長呈星形，棱形，細(xì)胞形態(tài)良好，胞體透亮，呈典型貼壁不規(guī)則形態(tài)，加入低濃度(0.5mg/L、0.

6、6mg/L)臭氧溶液后，對(duì)細(xì)胞形態(tài)無明顯影響，加入中濃度(1.5mg/L)臭氧溶液后細(xì)胞出現(xiàn)顆粒，有少部分胞體變小，提示細(xì)胞狀態(tài)受到一定程度影響。加入甲醛甲酚溶液后細(xì)胞形態(tài)明顯破壞，出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片，提示細(xì)胞大量死亡，破壞嚴(yán)重。
　　5、臭氧溶液對(duì)細(xì)胞增殖的影響：MTT結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組同低濃度臭氧溶液組(0.5mg/L、0.6mg/L)細(xì)胞相對(duì)增殖率均在100～103％之間，毒性評(píng)級(jí)為0級(jí)，其他1組中濃度臭氧溶液(1.5mg/

7、L)細(xì)胞相對(duì)增值率在75％～99％之間，毒性評(píng)級(jí)為1級(jí)。陽性對(duì)照組的細(xì)胞相對(duì)增值率在1～24％之間，毒性評(píng)級(jí)為4級(jí)，3組臭氧溶液的安全性為合格。
　　結(jié)論：1、水溫、容器是否密閉都會(huì)影響臭氧濃度，水溫越高臭氧濃度變化越快，容器密閉時(shí)，臭氧濃度穩(wěn)定。
　　2、臭氧溶液能夠有效的滅活HBV-DNA，并且臭氧濃度越高，其對(duì)HBV-DNA的滅活作用越強(qiáng)。臭氧濃度為0.6mg/L10min及0.5mg/L15min能將設(shè)定濃度的HVB